低温胁迫下西瓜同源二倍体和三倍体甲基化及基因表达的差异分析.pdfVIP

园 艺 学 报 2014 ，41（11）：2313 –2322 http ：// www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail ： yuanyixuebao@126.com 低温胁迫下西瓜同源二倍体和三倍体甲基化及 基因表达的差异分析 杨炳艳，霍秀爱，刘云婷，段会军* （河北农业大学农学院，华北作物种质资源研究与利用教育部重点实验室，河北保定 071001 ） 摘 要：为了揭示西瓜二倍体及三倍体在低温胁迫下的耐冷性分子机制，以西瓜二倍体自交系 ‘83166’（‘京欣1 号’品种的母本）及其同源三倍体为材料，利用 MSAP 及 cDNA-AFLP 技术研究低温 处理前后基因表达的差异，并对差异带进行克隆、测序和比对。28 对 MSAP 引物扩增得到 2 356 个位点， 其中二倍体经低温处理后总甲基化率下降 8.5%，三倍体下降 10.4%。将 13 条差异带与西瓜基因组数据库 比对，有7 条带确定是西瓜基因组序列。26 对 cDNA-AFLP 引物组合扩增出 1267 条带，其中二倍体上调 表达占 48.2% ，下调表达占 51.8% ；三倍体上调表达占 51.3%，下调表达占 48.7% 。21 条差异带在 NCBI 中找到了同源序列基因，包括假定蛋白（38.1% ）、能量与代谢（38.1% ）、信号转导 （9.5% ）、物质运输 （9.5% ） 以及 DNA 修饰（4.8% ），另有 9 条无同源序列。低温胁迫后，三倍体去甲基化率与上调表达量均大于二 倍体，而且三倍体诱导出更多的差异基因参与了能量代谢调控、信号转导、物质运输等过程，说明在抵 御低温胁迫中三倍体比二倍体有更强的耐冷性。 关键词：西瓜；低温；MSAP ；cDNA-AFLP ；基因表达 中图分类号：S 651 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2014 ）11-2313-10 MSAP and Differential Expression of Homologous Diploid and Triploid Watermelon Under Cold Stress * YANG Bing-yan ，HUO Xiu-ai ，LIU Yun-ting ，and DUAN Hui-jun （College of Agronomy，Agricultural University of Hebei ，North China Key Laboratory for Crop Germplasm Resources of Education Ministry ，Baoding ，Hebei 071001，China） Abstract ：The purpose of this study focused on molecular mechanism in low temperature of watermelon seeding ，making homologous diploid and triploid of watermelon of female precocious Jingxin as materials，using MSAP and cDNA-AFLP analysis of genes differentially expressed before and after low temperature stress ，and selected different bands to be cloned，sequenced and compared. A total of 2 356 locus were amplied after using 28 MSAP primer combinations. Levels of decline in the total methylation were 8.5% and 10.4% of the diploid and the triploid of