第十一章 毒理学实验方法.ppt

毒理学试验方法 试验方法 第一阶段试验 1、急性吸入毒性试验 适用范围： 本方法规定了动物急性吸入毒性试验的基本原则、技术和要求 本方法适用于评价气体、挥发性物质或气溶胶/颗粒物等化学品的急性吸入毒性作用。 试验目的： （1）检测化学品对实验动物的急性吸入毒性作用和强度。 （2）为亚急(慢)性等吸入毒性试验提供剂量选择的依据。 术语： 急性吸入毒性(Acute Inhalation Toxicity)： 实验动物短时间（24h内）持续吸入一种可吸入性受试样品后，在短期内出现的健康损害效应。 半数致死浓度（Median Lethal Concentration，LC50）：指在一定时间内经呼吸道吸入受试样品后引起受试动物发生死亡的概率为50%的浓度。以单位体积空气中受试样品的质量(mg/m3)来表示。 试验基本原则： 各试验组动物在一定时间内吸入不同浓度的受试样品，染毒浓度的选择可通过预试验确定。染毒后观察动物的毒性反应和死亡情况。试验期间死亡的动物要进行尸检，试验结束时仍存活的动物要处死并进行大体解剖。 试验方法 实验动物： 首选健康成年小鼠(18g～22g)和大鼠(180g～220g)，也可选用其它敏感动物。同性别各剂量组个体间体重相差不得超过平均体重的20%。试验前动物要在试验环境中至少适应 3～5d时间。 剂量设计： 根据所选方法的要求，原则上应设4～5个剂量组，每组动物一般为10只，雌雄各半。各剂量组间距大小以兼顾产生毒性大小和死亡为宜，通常以较大组距和较少量动物进行预试。如果受试样品毒性很低，也可采用一次限量法，即用20只动物（雌雄各半），10000 mg/m3吸入2h或 5000 mg/m3吸入4h，如未引起动物死亡，则不再进行多个剂量的急性吸入毒性试验。 染毒方法： （1）静式染毒法 （2）动式染毒法 静式染毒法 静式染毒是将实验动物放在一定体积的密闭容器（染毒柜）内，加入一定量的受试样品，并使其挥发，造成试验需要的受试样品浓度的空气，一次吸入性染毒2h。 （1）染毒柜的容积以每只染毒小鼠每小时不少于3L空气计，每只大鼠每小时不少于30L计。 （2）染毒浓度的计算：染毒浓度一般应采用实际测定浓度。在染毒期间一般可测4～5次，求其平均浓度。在无适当测试方法时。计算染毒浓度：C=(a×d/v) ×106 式中：C-- 染毒浓度(mg/m3) ；a-- 加入受试样品的量(ml) d-- 化学品密度；v-- 染毒柜容积(L) 动式染毒法 动式染毒是采用机械通风装置，连续不断地将含有一定浓度受试样品的空气均匀不断地送入染毒柜，空气交换量大约为12～15次/h，并排出等量的染毒气体，维持相对稳定的染毒浓度（对通过染毒柜的流动气体应不间断地进行监测，并至少记录 2 次）。一次吸入性染毒2h。当受试化合物需要特殊要求时，应用其它的气流速率。染毒时，染毒柜内应确保至少有19%的氧含量和均衡分配的染毒气体。一般情况下，为确保染毒柜内空气稳定，实验动物的体积不应超过染毒柜体积的5%。且染毒柜内应维持微弱的负压，以防受试样品泄露污染周围环境。同时，应注意防止受试样品爆炸。 观察期限及指标： （1）观察并记录染毒过程和观察期内的动物中毒和死亡情况。观察期限一般为14d，观察指标，计算LC50。 （2）对死亡动物进行尸检。观察期结束后，处死存活动物并进行大体解剖，如有必要，进行病理组织学检查。 试验结果评价 评价试验结果时，应将LC50与观察到的毒性效应和尸检所见相结合考虑，LC50值是受试样品急性毒性分级和标签标识以及判定受试样品经呼吸道吸入后引起动物死亡可能性大小的依据。引用LC50值时一定要注明所用实验动物的种属、性别、染毒方式及时间长短、观察期限等。评价应包括动物接触受试样品与动物异常表现（包括行为和症状改变、大体损伤、体重变化、致死效应及其它毒性作用）的发生率和严重程度之间的关系。? 鉴定报告内容 （1）受试样品名称、理化性状、配制方法、所用浓度； （2）动式染毒设备中的气流速度； （3）实验动物的种属、品系和来源（注明合格证号和动物级别）； （4）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、动物实验室合格证号； （5）所用染毒浓度和动物分组，每组所用动物性别、数量及体重范围； （6）计算LC50的方法； （7）染毒后动物中毒表现及出现时间和恢复情况、死亡时间、大体解剖所见； （8）列表报告结果（建议的表格形式见附录1-D），计算的LC50及其95%可信区间； （9）结论。 2、急性经皮毒性试验 适用范围： 本方法规定了动物急性经皮毒性试验的基本原则、技术和要求。 本方法适用于评价化学品的急性经皮毒性。 试验目的： 确定受试样品能否经皮肤吸收和短期经皮染毒所产生的毒性作用和强