DNA重组技术及应用 - 生物探索-探索生物科技价值 .pptVIP

DNA重组技术 王梁华 生物化学与分子生物学教研室 第二军医大学基础部 概 述 DNA重组技术 又名基因工程或遗传工程，是以分子生物学为基础的生物高科技，具体的说，通过对基因及其结构的操作，实现包括有价值的稀有蛋白的表达、基因诊断、基因治疗及转基因动物和植物等重要应用的实验技术。 DNA重组技术的可能性与限制 从基因克隆到人的克隆 技术的复杂程度和涉及多学科协同 安全问题及伦理学 生物技术的主要进展 基因操作技术 基因克隆技术；基因表达技术；基因测序技术；基因合成技术；多肽合成与测序技术；基因扩增技术；基因转移技术；噬菌体呈现系统 转基因动植物研究的重大突破 基因组计划 基因治疗技术 蛋白质工程技术 生物信息技术和生物芯片 基因工程与生物技术 基因工程属于生物技术范畴，生物技术（biotechnology）不是一个独立的学科而是一套技术或手段 广义的生物技术指任何利用活的生物体或其一部分生产产品或改良生物品质的技术；狭义的生物技术是专指以DNA重组技术和单克隆技术为标志发展起来的新技术 新的生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程几方面的内容 基因工程是生物技术的核心和关键，是主导技术 细胞技术是生物技术的基础 酶工程是生物技术的条件 发酵工程是生物技术获得最终产品的手段 生物技术是一个综合技术体系，其中基因工程和细胞融合技术最为突出 蛋白质工程（protein engineering）则是在基因工程基础上综合蛋白质化学、蛋白质晶体学、计算机学辅助设计等知识和技术发展起来的研究新领域，开创了按人类意愿设计和研制人类需要的蛋白质的新时期，被称为第二代基因工程 重组DNA技术 重组DNA技术的基本概念 重组DNA技术的基本步骤 重组DNA技术中应用的重要工具酶 重组DNA技术中应用的载体 重组DNA技术的基本概念 重组DNA技术(recombinant DNA technology) 是按人类的意愿，在体外对DNA分子进行重组， 再将重组分子导入受体细胞，使其在细胞中扩增 和繁殖，以获得该DNA分子的大量拷贝。 基因克隆（gene cloning），DNA克隆（DNA cloning），分子克隆（molecular cloning)， 基因工程（gene engineering），遗传工程（genetic engineering）等术语常与重组DNA技术通用。 重组DNA技术的建立和发展 1967-1970年R.Yuan和H.O.Smith等发现的限制性核酸内切酶为基因工程提供了有力的工具 1972年Berg等将SV-40病毒DNA与噬菌体P22DNA在体外重组成功，转化大肠杆菌，使本来在真核细胞中合成的蛋白质能在细菌中合成,打破了种属界限 1977年Boyer等首先将人工合成的生长激素释放抑制因子14肽的基因重组入质粒，成功地在大肠杆菌中合成得到这14肽 1978年Itakura（板仓）等使人生长激素191肽在大肠杆菌中表达成功 1979年美国基因技术公司用人工合成的人胰岛素基因重组转入大肠杆菌中合成人胰岛素 成 果（一） 转基因动植物和基因剔除动植物的成功 1982年Palmiter等将克隆的生长激素基因导入小鼠受精卵细胞核内 导入了凝血因子Ⅸ基因的转基因绵羊分泌的乳汁中含有丰富的凝血因子Ⅸ 1994年能比普通西红柿保鲜时间更长的转基因西红柿投放市场 1996年转基因玉米、转基因大豆相继投入商品生产 我国科学家将自己发现的蛋白酶抑制剂基因转入棉花获得抗棉铃虫的棉花株 到1996年全世界已有250万公顷土地种植转基因植物 成 果（二） 基因诊断与基因治疗是基因工程在医学领域发展的一个重要方面 1991年美国向一患先天性免疫缺陷病（遗传性腺苷脱氨酶ADA基因缺陷）的女孩体内导入重组的ADA基因，获得成功 我国也在1994年用导入人凝血因子Ⅸ基因的方法成功治疗了乙型血友病的患者 在我国用作基因诊断的试剂盒已有近百种之多。基因诊断和基因治疗正在发展之中 分子生物学新技术 核酸的化学合成从手工发展到全自动合成 1975-1977年Sanger、Maxam和Gilbert先后发明了三种DNA序列的快速测定法 90年代全自动核酸序列测定仪的问世；1985年Cetus公司Mullis等发明的聚合酶链式反应（PCR）的特定核酸序列扩增技术，更以其高灵敏度和特异性被广泛应用，对分子生物学的发展起到了重大的推动作用 基因工程的基本程序 分—载体和目的基因的分离 切—限制性内切酶 接—载体与目的基因连接成重组体 转—基因序列转入细胞 筛—目的基因序列克隆的筛选和鉴定 分—载体和目的基因的分离 目的基因的来源和分离 基因文库