上课实验 固定化酶制剂.pptVIP

吸附法 酶蛋白分子吸附在载体 共价偶联法 酶蛋白上的一些基团（如羧基、巯基、咪唑基等）能在温和条件下与载体共价结合，从而被固定化。 结合部位必须不是酶的活性中心，也不是维持其空间结构的必需基团。 交联法 交联法是指通过双功能试剂，将酶和酶联结成网状结构的方法。 结合部位也不是酶的活性中心，也不是维持其空间结构的必需基团。 包埋法 包埋法是将酶蛋白包埋在凝胶交联后的“格子”中 * * 1．制作固定化α-淀粉酶。 2．进行淀粉水解的测定。 基本要求： 发展要求： 通过此实验探讨固定化酶的应用价值。 1、酶制剂的概念和种类 （一）酶制剂 含有酶的制品 ①定义： 多酶片、加酶洗衣粉中的蛋白酶和脂肪酶 ②种类： A、液体酶制剂 治疗某些胃病的胃蛋白酶液 B、固体酶制剂 在食品、化工、轻纺、医药等领域大规模使用酶制剂。 酶制剂的优点有： 催化效率高、低能耗、低污染等。 2、酶制剂的优点 1、通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活； 2、溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本； 3、反应后会混在产物中，可能影响产品质量。(难分离） 3、酶制剂的缺点 1、固定化酶技术。即将酶固定在一定空间内的技术（如固定在不溶于水的载体上）。 2、固定化酶技术的优点： （1）使酶既能与反应物接触，又能与产物分离；酶不溶解在催化反应的溶液中，产物更易纯化 （2）固定在载体上的酶可以被反复利用。可较长时间地贮存和使用。 （二）固定化酶 固定化酶：就是将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。 介质本身不溶于水。 固定化的方法： 吸附法、 交联法、 包埋法、 共价偶连法等 3.固定化酶方法 实验原理：本实验是用吸附法将α-淀粉酶固定在石英砂上，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色表明水解产物糊精生成 淀粉 α-淀粉酶 糊精 β淀粉酶 葡萄糖 糖化淀粉酶 麦芽糖 这里使用的是枯草杆菌的α-淀粉酶，其作用的最适温度为50~75℃；最适PH为5.5~7.5 遇碘显蓝色 遇碘显红色 遇碘不显色 （三）实验 设备及用品: 5ml塑料注射器 50ml烧杯 滴管 自行车用气门心及夹子 注射器架 试管及微量离心管3支 材料: 1.α-淀粉酶的固定化:在烧杯中将5mgα-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中.由于酶不纯,可能有些不溶物.再加入5g石英砂,不时搅拌,30min后装入1支下端接有气门心并用夹子封住的注射器中(石英砂体积约4ml).用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器以除去未吸附的游离淀粉酶,流速为1ml/min。 2.可溶性淀粉溶液:取50mg可溶性淀粉溶于100ml热水中,搅拌均匀。 3. 5mmol/L KI-I2溶液：称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml完全溶解后装入滴瓶中。 固定化装置 反应柱 固定化酶 气门心 夹子 5ml注射器 * * *