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菜心小孢子发生和雄配子体发育探究 　　摘要：本文观察研究了菜心小孢子的发生及雄配子体的发育情况。结果表明，菜心（Brassica campestris L.ssp.Chinensis var.utilisTsenet Lee）花粉母细胞的胞质分裂为同时型。小孢子四分体呈正四面体型；菜心绒毡层细胞是同时型的，均来自初生壁内层，为腺质绒毡层。小孢子继续发育成2-细胞花粉：营养细胞和生殖细胞。生殖细胞经过一次有丝分裂形成两个精细胞，成熟时为3-细胞花粉。 关键词：菜心；小孢子发生；雄配子体；发育 菜心，又名菜薹，十字花科芸苔属白菜亚种的一个变种，原产中国，是我国华南的特产蔬菜之一，尤其是在广东和广西地区栽培历史悠久，品种资源丰富，一年四季均可栽培，是优质创汇蔬菜之一。有关菜心小孢子的发生及雄配子体发育的基础研究较少，本文对菜心小孢子的发生及雄配子体的形成、发育这一生殖过程做了较为详细的细胞形态学观察，为菜心的杂交育种，尤其是雄性不育的研究提供了依据。 1 材料与方法 供试材料四九菜心，于2004年10月在华南农业大学蔬菜教学基地取样，取当天开放的新鲜花朵，用卡诺氏液（Carnoy′s）（95%酒精：冰醋酸=3：1）固定，转入70%酒精置4摄氏度冰箱保存。按发育时期选取不同大小的花蕾分级，艾氏苏木精整体染色，梯度酒精脱水，五级氯仿透明，石蜡包埋，二甲苯脱蜡，中性树胶封片，连续切片，片厚8μm，光学显微观察，Olympus数码摄影。 2 结果与讨论 2.1花器的外部形态与结构 雄蕊是花的重要组成部分之一。菜心是十字花科蔬菜，总状花序，雌雄同花，花色鲜黄和浓黄。花蕾横切面结构如图版1。菜心雄蕊6枚，由花丝和花药组成，每个花药由2室构成，花药以背部着生于花丝上（背着药dorsifixed anther），花丝向上与药隔连接，药隔两侧是小孢子囊，正常花药由4个小孢子囊组成。花药成熟后，药室纵长开裂（longitudonal dehiscence），呈蝶形。雌蕊由柱头、花柱和子房构成，复雌蕊，湿型柱头（wet stigma），实心花柱，上位子房下位花（superior-hy-pogynous flower），多心室，侧膜胎座式（parietal placen-tantion），弯生胚珠（campylotropous ovule），2层珠被。 2.2小孢子的发生及雄配子体的发育 2.2.1未分化花药前。从雄蕊原基最初形成的一个很幼小的花药横切面来看，最初由原表皮包围着基本分生组织，结构简单。后来，由于花药4个角隅的细胞分裂较快，使花药具有四棱的外形。进一步发育时，原表皮进行垂周分裂，发育成表皮，包围整个花药。外面是一层表皮，表皮以内是一群分裂活跃的细胞（图版2，3）。 2.2.2造孢细胞期。幼小花药横切面4个角隅的最外面是一层表皮，表皮以内在四棱的角隅则分化出有几个较大的细胞，即孢原细胞（图版4，5）。孢原细胞经1次平周分裂，形成内外2层，外层形成连接表皮的初生周缘细胞（primary parietal cell），内层形成初生造孢细胞（primary sporogenous cell，图版6）。初生周缘细胞进行平周分裂和垂周分裂，产生药室内壁（endothecium）、中层（middle layer）和绒毡层（tapetum），三者与花药表皮的相应部分共同组成花粉囊壁（pollen sac wall）（图版7）。药室内壁，又称“纤维层”，是位于表皮以内的一层细胞，细胞呈扁平形。药室内壁以内的几层扁平细胞为中层细胞，通常为1～3层，在小孢子进行减数分裂的过程中逐渐解体和被吸收，最后消失。中层以内次生造孢以外一层体积较大的细胞为绒毡层，细胞质浓厚，含有较多的RNA和蛋白质，液泡小而少，初期绒毡层是单核的初生造孢细胞进行少数几次分裂，形成次生造孢细胞（secondary sporogenous cell，图版8），再进一步发育成小孢子母细胞（microspore mother cell，图版7）。 2.2.3小孢子母细胞期。小孢子母细胞位于小孢子囊的中央，细胞体积大且染色浅。由外向内可清楚地看到表皮、纤维层、中层和绒毡层。绒毡层细胞体积大，染色深，说明这时富含营养（图版7）。 2.2.4减数分裂期。小孢子母细胞开始减数分裂，小孢子母细胞体积较大，减数分裂过程中，所发生胞质分裂（cytokinesis）为同时型（simultaneous type），染色体的行为变化复杂，与一般典型情况是一致的。第1次减数分裂的前期很长，呈细丝状出现（图版9），后来会逐渐变短粗（图版10）；经中期、后期、末期后形成1双核细胞，不形成分隔壁（图版11）。最后绒毡层细胞内可见到双核或多核，这是由于细胞核