内科学课件心房纤颤患者血栓前状态及心房电重构的实验研究.pptVIP

心房纤颤患者血栓前状态及心房电重构的实验研究 前 言 前 言 心房纤颤是常见的心律失常 房颤并发的以缺血性脑卒中为主的血栓栓塞严重危害人类健康和生命 血栓前状态（PTS）作为一种重要的临床现象近年来受到国内外学者的广泛关注 及时识别PTS，确定房颤患者中的高危人群，将有助于预防和减少栓塞事件的发生 前 言 本研究提出房颤患者的PTS，并通过检测房颤患血浆中PTS分子标志物的水平，探讨房颤患者PTS的形成机制，寻找评估房颤患者栓塞危险性的新手段，以指导抗凝治疗。 前 言 心房纤颤具有自身延续性，慢性房颤的发生与维持似乎与房颤本身有关。据此，Allessie等提出了房颤引发房颤的观点。 在房颤的持续过程中，房颤本身可导致心房电生理学特性的变化，即心房电重构（AER）。 研究表明，在AER中心房肌细胞内钙超负荷起了重要作用 肌浆网钙泵在调控细胞内Ca2+浓度方面起决定作用 前 言 本研究采用RT-PCR方法，通过在分子生物学水平测定心房肌细胞肌浆网Ca2+-ATPase的mRNA表达，探讨房颤患者AER的机制，以加深对房颤本质的认识，从而使房颤预防和治疗的新的方法成为可能。 第一部分 房颤患者血浆中PTS分子标志物的测定 材料与方法 一、研究对象及分组情况 一、研究对象及分组情况 二、主要设备及制剂 （1） 1.主要仪器、设备 流式细胞仪 美国Becton-Dickinson公司 酶标仪 美国 光度计 美国 恒温水浴箱 上海医疗器械厂 水平混合器 江西医疗器械厂 50—200μl八通道加样器 100—200μl，10、25、50、100、500μl加样器 二、主要设备及制剂 三、实验方法 血浆血小板膜糖蛋白(GPIIb/IIIa)水平的测定 ——全血法流式细胞术 三、实验方法 血浆血栓调节蛋白（TM）水平的测定 ——ELISA法 血浆凝血酶-抗凝血酶III复合物（TAT）的测定——ELISA法 血浆二聚体D（D-dimer）的测定——ELISA法 TM标准曲线 TAT标准曲线 D-dimer标准曲线 统计学处理 应用SPSS For Windows 8.0软件，数据以均数±标准差表示，各组数据分别进行独立样本t检验，方差分析，单变量相关分析，回归分析等统计学方法。取0.05为统计学差异有显著性。 结 果 入选者的一般情况 入选对象共55人，其中房颤组29人，对照阻26人。房颤组又分为：持续房颤组18人，阵发房颤组11人。 入选者的一般情况 房颤组GPIIb/IIIa测得值明显高于对照组，差 别具有高度统计学意义(P0.01) 房颤组与对照组血浆GPIIb/IIIa比较 持续房颤组的GPIIb/IIIa水平明显高于阵发房颤组，差别有高度显著性(P0.01)， 持续房颤组与阵发房颤组GPIIb/IIIa比较 各组之间GPIIb/IIIa比较 房颤时间与GPIIb/IIIa水平的相关性 房颤患者血浆TM水平的变化 房颤组与对照组血浆TM水平比较 房颤患者血浆TM水平的变化 持续房颤组与阵发房颤组TM比较 房颤患者血浆TM水平的变化 各组之间血浆TM水平比较 房颤患者血浆TAT水平的变化 房颤组与对照组血浆TAT水平比较 房颤患者血浆TAT水平的变化 房颤患者血浆TAT水平的变化 各组之间血浆TAT水平比较 房颤患者血浆D-dimer的变化 房颤组与对照组血浆D-dimer比较 房颤患者血浆D-dimer的变化 持续房颤组与对照组血浆D-dimer比较 房颤患者血浆D-dimer的变化 各组之间血浆D-dimer水平比较 房颤患者心房心肌细胞肌浆网Ca2+-ATPase mRNA的基因表达 第二部分 材料和方法 实验方法 实验步骤 反应过程： RNA 2μg 随机引物 2μl 70℃反应5分钟后立即将管取出并置于冰浴中，加入以下试剂： 5×转录酶缓冲液 5μl dNTP(10mM) 1.25μl M-MLV(200u/μl) 1μl ?加DEPC水至总体积25μl 混匀后于37℃逆转录反应1小时。 75℃反应10分钟使酶灭活。 PCR（1） 引物序列 肌浆网Ca2+-ATPase： 正义链