P技术研究SAF基因编码区组蛋白修饰变化.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（３）：８１７ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 利用ＣｈＩＰ技术研究ＳＡＦ基因编码区组 蛋白修饰变化 １ ２ ３ ３ ３ ３ 曹锡梅 　罗旭光 　梁俊红 　张　潮 　白丽娟 　郭大玮 （１山西医科大学组织学与胚胎学教研室　太原　０３０００１　２山西医科大学微生物免疫学教研室　太原　０３０００１） （３山西医科大学法医学院　太原　０３０００１） 摘要　目的：探讨血清淀粉样蛋白Ａ转录激活因子（ｓｅｒｕｍａｍｙｌｏｉｄＡａｃｔｉｖａｔｉｎｇｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ， ＳＡＦ）编码区外显子ｅ４Ａ和ｅ４Ｂ区域的组蛋白表观遗传学信息，为进一步研究ＳＡＦ自身的转录调 控机制和该基因转录与前体 ｍＲＮＡ剪接的关系奠定基础。方法：利用染色体免疫共沉淀实验 （ＣｈＩＰ）分析ＳＡＦ基因编码区组蛋白修饰的变化。首先收集ＬＰＳ刺激不同时间的ＴＨＰ１细胞，终 浓度为１％甲醛交联蛋白质和 ＤＮＡ，利用超声波将其染色体随机断裂成适当大小的片段，选用 ＣｈＩＰ级别兔多克隆抗组蛋白Ｈ 抗体、兔多克隆抗组蛋白ＨＫ３６三甲基化抗体、兔多克隆抗组蛋 ３ ３ 白ＨＫ９单甲基化抗体和兔多克隆抗ＲＮＡ聚合酶ＩＩＣＴＤ重复区５号丝氨酸磷酸化抗体实验，以 ３ 富集得到的ＤＮＡ样品为模板进行半定量ＰＣＲ和定量ｑＰＣＲ分析。结果：ＬＰＳ刺激作用下ＳＡＦ基 因编码区组蛋白Ｈ 富集信号减弱、外显子ｅ４Ａ区域单个核小体上ＨＫ９单甲基化（ＨＫ９ｍｅ１）水 ３ ３ ３ 平减弱、ＨＫ３６三甲基化（ＨＫ３６ｍｅ３）修饰富集水平增加、ＲＮＡｐｏｌＩＩＣＴＤ重复序列第５号丝氨酸 ３ ３ 磷酸化水平降低。结论：ＬＰＳ刺激导致ＳＡＦ基因编码区组蛋白Ｈ 离散，该区域核小体解散、凝聚 ３ 的染色体重塑呈开放构象；含ＳＡＦ编码区基因信息的ＤＮＡ暴露，利于ＲＮＡｐｏｌＩＩ转录延伸。 关键词　血清淀粉样蛋白Ａ转录激活因子　组蛋白修饰　染色体免疫共沉淀实验　ＴＨＰ１细胞 中图分类号　Ｑ３３ ［３］ 　　染色体结构通过组蛋白翻译后修饰参与调控基因 染色体结构 。该项技术已经广泛应用于研究 ＤＮＡ 的表达，这个过程包括乙酰化、甲基化和二磷酸腺苷 结合蛋白质、染色体重塑、高分辨基因定位相关的普通 （ＡＤＰ）糖基化。以上这些组蛋白的翻译后修饰令核小 转录因子和蛋白质复合物。ＣｈＩＰ技术同ＤＮＡ基因芯 体形成独特的标记，从而具有调节与ＤＮＡ和组蛋白相 片或克隆技术结合起来可以鉴定新的目的基因，甚至 ［１２］ 互作用以及与其他蛋白质结合的能力 。识别这些 ［２，４］ 整个基因组环境中目的蛋白的ＤＮＡ结合位点 。 特定修饰以及这些修饰在调节染色体重塑中相互作用 　　炎症反应基因转录调控过程中，血清淀粉样蛋白Ａ 的方法，将有助于揭示依靠表观遗传性修饰所调节基 转录激活因子（ｓｅｒｕｍａｍｙｌｏｉｄＡａｃｔｉｖａｔｉｎｇｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ 因表达作