硅藻检验方法研究进展.docVIP

硅藻检验方法研究进展 赵建1，胡孙林2，刘超2，温锦锋2，张又川1，苏会芳1（1.中山大学中山医学院法医学系，广州 510080，2.广州市刑事科学技术研究所，广州 510030） 摘 要：硅藻检验被认为是溺死诊断的“金标准”。本文介绍国内外硅藻检验的样本采集、检验方法、结果评价的研究进展，并对硅藻检验研究进行展望。 关键词：法医病理学；溺死；硅藻检验 Advances in the research of methods of diatom test ZHAO Jian，HU Sun-lin，LIU Chao，et al.(Faculty of Forensic Medicine，Zhongshan School of Medicine，Sun Yat-Sen University，Guangzhou 510080，China) ABSTRACT：Diatom test is considered as the“golden standard”for the diagnosis of drowning. In this paper we introduced the domestic and overseas advances in the research field of diatom test including sample collection，methods of diatom test and evaluation of result. Prospects for diatom test in the diagnosis of drowning were proposed as well. KEY WORDS：Forensic Pathology；Drowning；Diatom test 溺死诊断的方法有很多，其中硅藻检验在解决溺死案件的定性问题中扮演了重要的角色。作者就国内外有关硅藻的形态和结构、检验样本的采集、检验方法、检验结果评价等研究现状作一综述，旨在为法医学硅藻检验提供参考。 1硅藻的形态和结构 硅藻是一种单细胞藻类，全世界约有16 000多种，体长一般在1μm至200μm之间，其最明显的特征是细胞壁除个别种类外，均高度硅质化，形成上、下两个透明的壳，以壳环带套合形成一个硅质细胞壁。硅藻的生境非常广泛，地球上凡是有水滞留的地方，小至由雨水积聚成的小水坑，大至占地球表面71%的海洋，几乎都能见到硅藻的踪迹[1]。硅藻细胞壁因为抵抗力强而不易被破坏，硅质含量高者，即使用浓硫酸、浓硝酸煮沸甚至高温烧灼也不被破坏[2]。 2硅藻检验样本的采集 硅藻检验有意义的先决条件是采集样本的过程中没有污染。因此，所有的样本提取在解剖开始的时候就必须按照规定的顺序进行[3]。Giri等[4]指出，肺、心、肾中发现硅藻直径较大，而脑、骨髓中发现的硅藻直径多在10μm以内。由于非溺死者肺、心、肾中也发现了硅藻，所以可靠的取材部位应为脑、骨髓。国内常规的取材部位为肺、肝、肾，而腐败尸体的骨髓及牙髓被认为是最可靠的检材[5]。 3硅藻检验方法 1904年，Revenstorf从肺切面上挤出液体，直接放置在显微镜下就可以检查出水中的浮游生物。自此以后，国内外法医工作者对硅藻检验方法进行了深入的研究，主要包括以下方法： 3.1强酸消化法 强酸消化法是硅藻检验的传统方法，是目前法医学实践中最常用的一种检验方法。此法采用硝酸和乙醇（或乙醚）消解组织，具有组织消解时间短、消解完全、程序简单、成本低等优点，是目前我国实际检案中的一种标准化方法[6]。但是此法安全性较差，易造成污染，而且最后检测到的多是一些耐酸性的无机硅藻，其他类型硅藻则容易被破坏[7]。胡孙林等[8]研究证实目前硅藻检验方法中所采用的离心处理步骤导致了部分硅藻损失。 3.2 微波消解法 近几年发展起来的微波消解法为消解各类生物组织的先进方法。 孙维琦等[9]曾报道用光纤压力自控微波消解仪和压力可控密闭微波消解罐消解组织的方法。胡孙林等[10]曾报道采用MW3000微波消解仪进行组织消解。此法具有高效、安全、环保、消解后的硅藻结构完整、残骸碎片极少的特点。 此法消解后的液体可以采用真空抽滤法富集硅藻[10]。通过真空抽滤提取组织消解液中的硅藻，可最大程度避免硅藻损失，提高硅藻提取的回收率[7]。 3.3酶消化法 蛋白酶为消解组织的另一种试剂。Ming等[12]曾报道，相比硝酸加过氧化氢、破机罐法和Soluene-350，蛋白酶K是试剂中最好的选择。因为蛋白酶K消化后的结果显示出绝大多数的硅藻被回收和硅藻结构几乎都被保持。Takeichi等[13]研究表明用蛋白酶K消化检验硅藻时，可以用于福尔马林固定的组织，且在具有高传染性疾病的尸体案件中推荐使用福尔马林固定的组织。何冠英等