武汉生物工程学院生物学实验教学中心.PDFVIP

武汉生物工程学院生物学实验教学中心 典型教学案例视频简介 植物细胞工程实验： 蝴蝶兰离体无性系快速繁殖实验…………………………………1 基因工程实验： 漆酶基因的克隆实验………………………………………………4 发酵工程实验： 产植酸酶菌株的选育与发酵实验…………………………………5 视频一：蝴蝶兰离体无性系快速繁殖实验 课程类型：植物细胞工程实验 主讲教师：周 全 细胞工程是生物工程重要的的组成部分，以动物和植物在细胞、组织和器官 水平进行育种和繁殖为主要工作内容。在植物细胞工程中，利用组织培养技术进 行快速繁殖优良植物种苗是目前该学科在生产应用中产业化程度最高的项目。 植物细胞工程是一门实践性很强的工程学科，需要一定学时的实验教学实 践，为今后从事相关工作打下良好的实践基础。通过植物细胞工程综合实验平台 的学习，学生不仅能够进一步巩固提高无菌操作等基本技能，而且能深入理解植 物细胞全能性理论，并能独立开展植物组织培养的相关研究及生产实践等的具体 工作，为今后继续深造和就业做好准备。 本实验为设计性实验，以快速、高效获得蝴蝶兰再生植株为目标，探索研究 蝴蝶兰离体快速繁殖的适宜培养基和培养条件。本实验分别从种子萌发、叶片诱 导原球茎和丛生芽增殖三种途径探索蝴蝶兰离体快繁技术，通过对原球茎诱导、 原球茎或丛生芽增殖、根的分化以及炼苗移栽等环节的实践探索，旨在培养学生 利用所学理论基础知识和基本技能解决实际问题，并具备发现问题，解决问题的 能力。 一、实验目的 1、了解蝴蝶兰离体快速繁殖的意义； 2、掌握蝴蝶兰组织培养的技术路线； 3、掌握植物组织培养的一般技能； 4、进一步巩固提高无菌操作技能； 5、掌握一般的试验设计和统计分析方法； 6、关注一些组培手法的运用。 二、实验设计 蝴蝶兰离体快速繁殖的途径有三种： 1、种子无菌萌发：种子→原球茎→分化成苗→炼苗移栽 2、原球茎途径：叶片→原球茎→增殖→分化成苗→生根→炼苗移栽 3、丛生芽途径：无菌苗→丛生芽→生根→炼苗移栽 本实验课将学生分成 3 组，分别以蝴蝶兰蒴果、无菌苗叶片和无菌苗为外植 体对蝴蝶兰离体培养。因而，实验的主要技术路线可汇总为： 1. 种子或叶片诱导原球茎→原球茎增殖→分化成苗→生根→移栽 2.无菌苗→丛生芽→生根→炼苗移栽 1 三、仪器试剂 1. 实验药品 花宝 1 号、MS 全套母液、胰蛋白胨、柠檬酸、椰子汁（CM ）、蔗糖、琼脂、 活性炭（AC ）、TDZ、6-BA、NAA 等。 2. 仪器设备 电子天平（0.1mg 感量）、10L 手提高压蒸汽灭菌锅、无菌接种室（含超净 工作台）、培养室（配备空调、带光源培养架）、人工光照培养箱等。 四、实验步骤 1、配制培养基 分别配制种子萌发、叶片诱导原球茎和丛生芽诱导及增殖的培养基，参考培 养基如下列出。指导每组学生对植物激素的用量、基本培养基的种类以及附加物 质的种类进行梯度试验设计。培养基灭菌条件为：121℃～126℃，30 分钟。 1.原球茎诱导 1.1 种子萌发原球茎 花宝 1 号3g •L-1+胰蛋白胨2g •L-1+AC1g •L-1+CM10%+蔗糖2.0%+琼脂0.8% 。 1.2 叶片诱导原球茎 1/2MS+TDZ 1.0mg ·L-1+NAA 1.0 mg ·L-1+柠檬酸 0.03%+蔗糖 20 g ·L-1+琼 脂 7.0g ·L-1+CM20% 。 1.3 丛生芽诱导及增殖 1/3MS+TDZ2.0mg•L-1+NAA0.1mg •L-1+蔗糖 20g •L-1+琼脂 8g •L-1+活性炭 0.2%+CM20% 。 2 、接种培养 三个小组的接种材料和培养目标不同，分别独立开展试验工作：①将蝴蝶兰 蒴果消毒后，剖开取其种子接种到种子萌发培养基，以得到原球茎；②取蝴蝶兰 无菌试管苗，切取 1cm 见方的叶片接种（设计对叶片进行划伤处理为对照），以 诱导原球茎；③将切去叶片的无根试管苗接种到丛生芽增殖培养基中，以诱导出 丛生芽。 接种后，将材料放入培养室恒温光照培养：T=25℃,L=1500LX。培养 1 月以 后统计试验结果：