四色荧光标记DNA自动测序中一例典型错读码的校正-海洋科学.PDFVIP

四色荧光标记∆ΝΑ 自动测序中一例典型错读码的校正 ΤΗΕΧΟΡΡΕΧΤΙΟΝΟΦΑΤΨΠΙΧΑΛΛΨΦΑΛΣΕΡΕΑ∆ΧΟ∆ΕΙΝ∆ΝΑ ΑΥΤΟ−ΣΕ ΥΕΝΧΕΛΑΒΕΛΛΕ∆ΒΨ4ΧΟΛΟΡ ΦΛΥΟΡΕΣΧΕΝΤ Θ ∆ΨΕΣ 马洪明 路新枝 王 勇 青岛海洋大学食品工程系 中国科学院海洋研究所青岛 关键词 自动测序荧光标记 ⁄ 测序是现代分子生物学研究中的重要技术 术的基础上发展起来的 采用荧光标记的自动测序仪 ⁄ ∀ ∀ 已在各个领域被广泛应用 四色荧光标记自动测序采 随着人类基因组计划的实施⁄测序技术虽然在 ∀ 原理上没有新突破 仍然依赖于 的酶法 但在 用种具有不同发射波长的荧光染料标记由聚合酶 ≥ 不断提高自动化程度 降低成本方面取得了很大的进 ! 第一作者 马洪明 出生于 年 硕士 讲师 展 测序效率目前已有很大提高 大规模测序一个碱基 ∀ ∀ 的成本从 年的 美元降到目前的约 美分 ∞2 ∏∏ ∀ 目前各种⁄ 自动测序技术都是在荧光标记技 收稿日期22修回日期22 海洋科学 年 第 卷 第 期 实验与技术 ∞÷°∞∞× ×∞≤≠ 链终止反应产生的一系列终止片段 经过聚丙烯酰氨 或毛细管电泳分离后 采用激光对分离的 片段 ⁄ 携带的荧光信号进行激发检测并记录不同发射波长 的信号 经计算机处理 最后得到序列信息 因此 对 ∀ 不同荧光激发信号的精确区分是影响 ⁄ 自动测序 数据准确性的关键因素∀ 目前采用的荧光染料是荧光素ƒ∞和罗丹 明 它们的优点是激发光谱窄 信号强 ×÷∀ 度好 但不同染料的发射波长有部分重叠 而且电泳 行为有差异使被标记的 ⁄片段迁移率发生不同 的变化 导致荧光激发信号一定程度的混杂 仪器须 ∀ 对检测到的信号通过软件进行计算校正才能得到最 终结果 目前 公司的分析软件 ∀ °≥2 ∏ ∂保证对测出的前不低于 的准确率 这样的准确率对于大规模测序是可以 ∀ 接受的 但在某些工作中 如杂合性分析 点突变检 ! 测 关键调控序列的克隆等 是远远不够的 产生分析 ! ∀ 错误的原因一方面可能是测序反应或电泳分离不够 理想而另一方面则是由于分析软件对数据的处理能 力的缺陷所导致 这些软件处理错误通过优化操作和