菊花的组织培养(新).pptVIP

菊花是菊科菊属的多年生宿根草本植物,是我国的传统名花和世界四大切花(月季、康乃馨、菊花、唐菖蒲)之一。 长期以来菊花采用分株、扦插等无性繁殖方法进行繁殖 但是传统的繁殖方法易受环境影响,繁殖周期长,随着市场需 求的急剧增加,已经不能满足市场日益发展的需要。 植物组织培养具有增殖效率高、繁殖速度快的特点,可以用较短的时间和较少的空间生产出大量的试管苗 课题1 菊花的组织培养 一、植物组织培养概念 二、植物组织培养的理论基础——细胞全能性 概念：高度分化的植物细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。 基础：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质。 表达条件：离体条件 无菌操作 适宜物质的诱导和调节（植物激素） 适宜的营养物质 温度、酸碱度、光照等条件 的控制 全能性的比较: 五 影响植物组织培养的因素 材料的种类、年龄及保存时间长短等 营养 植物激素 PH、温度、光照等条件 3 植物激素的影响 常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素 生长素、细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素 在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈加强的趋势 激素的使用顺序、使用的量及比例影响植物细胞的发育方向 4 pH、温度、光照 pH控制在5.8左右 温度控制在18－22℃ 每日用日光灯照射12h 六 菊花的组织培养 （一）制备MS固体培养基 接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒 培养温度控制在18-22℃ 每日用日光灯光照12h 讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？ 答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。 微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。 生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA） 细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤（ 6－BA）、玉米素（ZT） 赤霉素类： 赤霉酸（GA3） 分化频率高 同时使用 细胞既分裂、也分化 先使用细胞分裂素后使用生长素 有利于细胞分裂，但不利分化 先使用生长素，后使用细胞分裂素 实验结果 使用顺序 实验结果 使用比例 生长素 细胞分裂素 生长素 细胞分裂素 生长素 细胞分裂素 ＝ 有利于根的分化 有利于芽的分化，抑制根的分化 促进愈伤组织生长 （二）外植体消毒 （三）接种 （四）培养 （五）移栽 （六）栽培 （一）制备MS固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备 1、配制各种母液 ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量 2、配制培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml ① 配制培养液 ② 调PH ③培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素 3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒 2、消毒 ①流水冲洗 菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 ② 酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗 ③消毒液处理 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液 （三）接种 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟 1、接种室消毒 2、无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。 3、材料的切取和接种 4、接种注意事项 ①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种 ②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体