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左乙拉西坦逃避P―糖蛋白药理学机制探究 　　摘要：目的 初步探讨左乙拉西坦逃避P-糖蛋白的药理学机制。方法30例诊断明确的难治性部分性癫痫患者根据随机、双盲、安慰剂对照原则，随机接受抗癫痫药物左乙拉西坦添加治疗或安慰剂治疗。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测基因型。结果 CC基因型受试者中，左乙拉西坦治疗组9例，1例癫痫发作完全控制，3例显效，2例有效，发作减少50%的有效率为6/9；安慰剂组7例中仅1例有效，发作减少50%的有效率为1/7。结论 左乙拉西坦添加治疗CC基因型的难治部分性癫痫患者疗效良好，可能与其逃避了P-糖蛋白的外排作用有关。 关键词：左乙拉西坦； P-糖蛋白；药理学；癫痫 目前认为，难治性癫痫的耐药性主要与多药耐药基因1（multidrug resistance gene1， MDR1）中CC基因型及其所编码的P-糖蛋白有关。左乙拉西坦是一种新型抗癫痫药物，添加治疗难治部分性癫痫发作有效且安全，其一药理学机制可能是左乙拉西坦逃避MDR1中CC基因型编码的 P-糖蛋白的外排作用，进入致痫灶而发挥抗癫痫作用。本研究就这一药理学机制进行初步探讨。 1 资料与方法 1.1一般资料 30例受试者均来自2006年3月～2007年11月天津医科大学总医院神经内科癫痫门诊。 1.2纳入标准 ①获得受试者签署的知情同意书；②男性或女性受试者，年龄18～65岁；③根据国际抗癫痫联盟（International League Against Epilepsy，ILAE）分类标准确诊为部分性癫痫无论有无继发性全身发作者，病史为6个月以上；④回顾基线阶段的8w内应出现至少8次部分性癫痫发作；⑤筛选访视前，受试者持续、稳定、规范服用至少3个月1～4种其他抗癫痫药物。 1.3排除标准 ①正在妊娠或哺乳期的妇女；②有其他严重的器质性疾病、精神病以及神经系统进行性或变性疾病者；③基线期存在异常实验室指标；④有酒精或其他药物成瘾史或滥用史者；⑤既往治疗依从性不良者；⑥筛选访视前3个月内有癫痫持续状态病史者。 1.4方法 1.4.1试验药品 左乙拉西坦和安慰剂均为外观、形状、颜色基本一致的片剂，采用相同包装。试验药物左乙拉西坦片（250mg/片）、安慰剂（左乙拉西坦空白 模拟片）均由珠海联邦制药股份有限公司中山分公司提供。 1.4.2试验设计 30例受试者在进入临床研究之前采取肘静脉血2ml以备基因型检测。采用随机、双盲、安慰剂对照添加治疗研究方法，设置左乙拉西坦添加治疗组和安慰剂组，样本比例为2∶1，研究流程如图1所示。①回顾性基线期：详细询问和判断患者接受添加治疗前8w内（回顾性基线期）癫痫发作的类型及发作频率，记录神经影像学、脑电图及其他实验室检查结果，以及抗癫痫药物的使用情况；②逐量加药期：两组受试者随机接受试验药品左乙拉西坦或安慰剂，初始剂量为0.50g口服，2次/d亦即1.00g/d；2w后药物剂量增加为1.00g口服，2次/d即2.00g/d；再2w后增至1.50g， 2次/d即3.00g/d。药物加量期共为4w；③剂量维持期：达到上述剂量后稳定服药，维持治疗l2w；④逐量减药期：在此期间内，药物剂量逐渐递减至1.00g，2次/d即2.00g/d；2w后减至0.50g，2次/d即1.00g/d，共治疗20w。受试者在每次访视时必须返还所有未服用药物，根据核查剩余药品数量评估患者的依从性。 1.4.3基因型检测 ①外周血基因组DNA提取：树脂型基因组TM DNA提取试剂盒（包括纯化树脂、GN结合液、漂洗液和离心纯化柱）由北京赛百盛基因技术有限公司提供。转移0.50ml全血至1ml纯化树脂中，利用纯化树脂吸附DNA，以1.00ml GN结合液和0.50ml漂洗液漂洗纯化树脂；在离心纯化柱中用0.80ml无水乙醇脱水，再以TE缓冲液洗脱纯化树脂，洗脱下来液体即为基因组DNA；②聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测：反应总体积为25μl，DNA模板约为100ng，DNA buffer 2.50 μl，Tag酶1.25U，dNTP3.80mmol（均由南京田埂公司提供）。引物各10pmol（南京金思特科技有限公司），其中上游引物为：5-ACTCTTGTTTTCAGCTGCTTG-3’；下游引物：5’-AGAGACTTACATTAGGCAGTGACTC-3’。PCR反应条件为94℃预变性5min，然后94℃变性30s，58℃复性20s，72℃延伸30s，共进行33个循环，最后72℃再延长5min。10μl PCR产物与0.50μl的DpnⅡ限制性核酸内切酶（纽英伦生物技术北京有限公司）37℃温浴4h。取5μl酶切后产物，质量浓度为2.50%琼脂