微生物谷氨酰胺转氨酶催化细胞色素C赖氨酸残基的定点修饰.PDFVIP

中国生物工程杂志 China Biotechnology 微生物谷氨酰胺转氨酶催化细胞色素 赖氨酸残基 C 的定点修饰 1 2 2 1 张宸 ，陈韶华 ，吴文倩 ，周建芹 * 1苏州大学医学部药学院，江苏苏州215123，2苏州大学医学部实验中心，江苏苏州215123 摘 要:研究微生物谷氨酰胺转氨酶 （mTG ）催化细胞色素C （Cyt C）的PEG 定点修饰的可行性，并优化 修饰条件，研究PEG 修饰对Cyt C 性质的影响。将单甲氧基聚乙二醇氨 （mPEG-NH ）与N-苄氧羰基-谷 2 氨酰胺-甘氨酸 （CBZ-QG ）共价结合制备含谷氨酰胺残基的甲氧基聚乙二醇衍生物 （N-苄氧羰基-谷氨酰 胺-甘氨酰-单甲氧基聚乙二醇，CBZ-QG-mPEG ）；mTG 分别催化mPEG-NH 、CBZ-QG-mPEG （mTG ）修 2 饰Cyt C ，研究酶法定点修饰Cyt C 残基的可行性；改变酶的用量、温度、反应时间和pH 值等反应条件优 化谷胺酰胺转氨酶催化修饰Cyt C 的条件。研究结果表明： （1）mPEG-NH2 不能作为mTG 的底物修饰 Cyt C ，甲氧基聚乙二醇氨 （mPEG-NH ）分子上引入谷氨酰胺残基后，在mTG 的催化作用下了实现Cyt C 1 2 v 的PEG 修饰，而且基于mTG 的底物特异性实现了PEG 定点修饰Cyt C 的赖氨酸残基；（2 ）37°C 温度下， 7 8 pH 值8.0 的溶液中，1 mg/mL 的mTG 催化修饰反应2 h 是最佳修饰反应条件；（3 ）化学法PEG 修饰Cyt C 6 0 产物复杂，是多种多点修饰产物的混合物，酶法催化PEG 修饰Cyt C 只产生单一产物； （4 ）与天然Cyt C 0 相比，修饰后Cyt C 的活力、稳定性都有所提高。本研究提出的谷胺酰胺转胺酶催化修饰法解决了蛋白质 . 7 0 Lys 残基难以定点修饰的难题，拓展了mTG 在蛋白质修饰方面的应用。 7 关键词：谷胺酰胺转氨酶，细胞色素C， 定点修饰 1 0 2 : Modifiationofcytochromecatthelevel oflysineresiduesmediatedby microbial v i transglutaminase X 1 2 2 1 a Zhang Chen , Chen Shao-hua, Wu Wen-qian , Zhou Jian-qin * n 1 College of Pharmaceutical Sciences, Soochow University, Suzhou 2 15123,