氯过氧化物酶活性中心结构域中Mn2与酶催化行为的关系.PDF

Vol.34 高等 学校 化 学 学报 No.4 2013年4 月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES摇 摇 摇 摇 摇 摇 875~880 doi:10.7503/ cjc 摇 摇 氯氯过氧化物酶活性中心结构域中 2+ Mn 与酶催化行为的关系 1 1,2 1,2 1,2 1,2 李海云 ,蒋育澄 ,胡满成 ,李淑妮 ,翟全国 (1. 陕西师范大学化学化工学院,2. 大分子科学陕西省重点实验室,西安710062) 摘要摇 通过乙二胺四乙酸二钠(EDTA)配位竞争反应结合石墨炉原子吸收及电感耦合等离子体发射检测结 2+ 2+ 果,为氯过氧化物酶(CPO)活性中心血红素丙酸根与金属Mn 配位结合提供了更直接的证据;基于Mn 移 2+ 除前后CPO的紫外特征吸收光谱、 圆二色谱以及氯化活性和过氧化活性的变化,阐明了Mn 的存在对于保 持酶活性中心的结构域、稳定CPO的优势构象具有一定作用,是酶分子表现活力所必需的结构元素. 本研 2+ 2+ 究还发现移除Mn 前后CPO血红素活性中心微环境的变化是一个可逆过程,重新引入Mn 后活性可恢复, + 3+ 2+ 并且以外源性Ag 和Cr 替代Mn 后,CPO的氯化活性和过氧化活性分别比天然态的酶有所改善,为通过化 学修饰提高CPO的催化活性提供了新的途径. 2+ 关键词摇 氯过氧化物酶;Mn ;酶催化行为;化学修饰;外源离子 中图分类号摇 O629郾8摇 摇 摇 摇 文献标志码摇 A 氯过氧化物酶(CPO)目前被认为是血红素过氧化物酶家族中催化性能最广泛的酶,兼具过氧化物 酶、过氧化氢酶和细胞色素P450 的多种催化活性,其最独特的催化活性是对脂肪族分子C—H键的氧 [1~4] 化氯化功能 . CPO催化性能的多样性被归因于其独特的活性位点结构,晶体结构研究显示其铁卟 啉辅基中铁的近端配体类似于细胞色素P450,是以半胱氨酸(Cys29) 的巯基硫原子作为第五轴向配 体. 但与P450不同的是,CPO 血红素的远端类似于其它过氧化物酶,是亲水性环境,并以谷氨酸 [5,6] (Glu183)而非组氨酸来充当酸碱催化成分 . 另外,CPO晶体结构显示其血红素的丙酸根与1个金属阳离子配位,电子自旋共振及X射线荧光 2+ 光谱分析推测这一位点的金属阳离子为Mn ,它除与丙酸根配位外,还与另外5个氨基酸残基上的羧 基氧原子或溶剂水分子形成八面体场配位结构. 但这一推测目前未有文献提供直接的数据支撑,同时 这一位点上金属离子的存在与酶催化活性的构效关系也未被阐明. 本文通过乙二胺四乙酸二钠 (EDTA)配位竞争反应结合石墨炉原子吸收及电感耦合等离子体发射光谱检测更直接地证实了这一位 2+ 点的金属离子为Mn ,并通过紫外光谱和圆二色谱测试结合酶的多种催化活性分析,对比了天然态