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酶 工 程 查 阅 文 献 超氧化物歧化酶 用 途 活力测定原理 活力测定方法 1．邻苯三酚自氧化反应速度的测定 测定实验在25℃下进行，按下面酶活力测定加样表(表1-2-1)中的顺序和用量向1 cm厚度的比色池中加入预热至25℃的缓冲液、SOD酶样液、重蒸水和邻苯三酚溶液(以10 mmol／L）盐酸代替邻苯三酚作为测定对照)，加入邻苯三酚溶液后立即启动秒表计时，用分光光度计于420 nm波长处每隔30 S测定1次吸光度，共测10个数据。以吸光度为纵坐标、时间为横坐标作图，根据线性关系部分的斜率求出自氧化反应速度(△A420／min)。适当改变邻苯三酚溶液的用量，使自氧化反应速度为0．02／min。 2．酶抑制下自氧化反应速度的测定 测定过程与测定邻苯三酚自氧化反应速度的相同，只是在此反应系统中加入待测的SOD酶样液。适当增减SOD酶样液的稀释度或用量，使酶抑制下的自氧化反应速度为0．007～0．013／min，即只能抑制自氧化反应的35％～65％(超出此范围，抑制自氧化反应的程度与酶量不成比例)。 糖化酶 用 途 活力测定原理 活力测定方法 植酸酶 用 途 活力测定原理 活力测定方法 蛋白酶 用 途 活力测定原理 活力测定方法 * * 下列酶的用途，活力测定原理及方法： 1.超氧化物歧化酶（SOD） 2.糖化酶 3.植酸酶 4.蛋白酶 参考文献： 1.袁勤生主编《超氧化物歧化酶》华东理工大学出版社,2009.05. 2.汪文俊，熊海容主编；王海英，郭小华，张华山副主编；王海英，吴元喜，汪文俊等编委《生物工程专业实验教程》华中科技大学出版社,2012.04. 1）可抑制心脑血管疾病：机体的衰老与体内氧自由基的产生与积累密切相关， SOD 可清除人体内过多的有害的氧自由，是对健康的有益的功效成分。2）抗衰老作用： 年龄的增长和某些体外因素会造成机体和皮肤组织自由基产生超过机体正常清除自由基的的能力，从而使皮肤组织造成伤害，导致衰老。?3）自身免疫性疾病： SOD 对各类自身免疫性疾病都有一定的疗效，如红斑狼疮、硬皮病、皮肌炎等。4.肺气肿：肺气肿患者亦可使用 SOD ，但应在病变初期肺弹性纤维尚未受到损害时使用，疗效较好。?5）辐射病及辐射防护：本品可用来治疗因放疗引起的膀胱炎、皮肌炎、红斑狼疮及白细胞减少等疾病，对有可能受到电离辐射的人员，也可注射 SOD 作为预防措施。?6）老年性白内障： 对这类疾病应在进入老年期前即开始经常服用抗氧化剂，或者说经常注射 SOD。 邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出氧离子，生成带色的中间产物。反应开始后反应液先变成黄棕色，几分钟后转录，几小时后又转变成黄色，这是因为生成的中间产物不断氧化的结果。本实验测定的是在邻苯三酚自氧化过程的初始阶段，中间产物的积累在滞留30～45 S后，与时间成线性关系，一般线性关系维持时间在4 min的范围内，中间产物在420 nm波长处有强烈光吸收。当有SOD存在时，由于它能催化O2-与H+结合生成O2和H2O2,从而阻止了中间产物的积累，因此，通过计算即可求出SOD的酶活力。 参考文献： 1.张树政主编《酶制剂工业 下册》科学出版社,1984年07月第1版. 2.李江华主编《发酵工程实验》高等教育出版社,2011.06. 糖化酶的主要用途是作为淀粉糖化剂。 酸水解工艺缺点很多：①需用耐酸耐压设备；②需用精制淀粉为原料；⑧淀粉投料浓度低，仅20％左右；④水解后必须中和，色泽深，精制费用大；⑤淀粉转化为葡萄糖的收率低，不超过90％；⑥水解时当DE值达到80％，由于逆聚合反应而生成多量带有声一键呈苦味的龙胆二糖等低聚糖，葡萄糖必须用结晶法精制才能将苦味去除；⑦久贮届还因生成氧化甲基糠醛而转变为褐色。使用淀粉酶糖化，无上述缺点，且可采用粗淀粉原料，投料浓度可高达50％(以干重计)，得糖率高(100公斤淀粉约得10公斤的葡萄糖)，因不需中和等手续，因此杂质含量低，可以直接利用喷雾干燥法制糖粉。此方法简要步骤是以淀粉作成30一40％粉浆，在pH 6．O一6．5加入a一淀粉酶，90℃左右液化至碘反应消失，冷却到55—60。在pH4．5—5，加入糖化酶保温糖化48小时左右，则几乎全部淀粉转变为葡萄糖，再经脱色浓缩，结晶或喷雾干燥等处理，便成为产品，其DE值可达98％以上。 糖化酶广泛分布于能直接以淀粉为营养源的所有生物体中。糖化酶催化淀粉水解，分解α一1，4糖苷键生成葡萄糖，葡萄糖分子中含有醛基，能被次碘酸钠氧化，过量的次碘酸钠酸化后析出碘，再用硫代硫酸钠标准溶液滴定，计算出糖化酶活力。 于甲、乙两支50 mL比色管中，分别加入可溶性淀粉溶液25 mL和pH 4．6乙酸缓冲液5 mL，摇匀后在40℃恒温水