纤维二糖水解酶I吸附结构域的新功能-中国科学杂志社.PDF

中国科学 C 辑 :生命科学 2008 年 第 38 卷 第 7 期 : 678 ~ 686 www. scichina. com life. scichina. com SCIENCE IN CHINA PRESS 纤维二糖水解酶I 吸附结构域的新功能 王禄山, 张玉忠, 高培基* 山东大学微生物技术国家重点实验室, 济南 250100 * 联系人, E-mail: gaopj@ 收稿日期: 2007-12-18; 接受日期: 2008-02-26 国家重点基础研究发展计划(批准号: 2004CB719702)、国家自然科学基金(批准号:和山东省中青年科学科研奖励基金(批准号: 2005BS06004)资助项目 摘要 从拟康氏木霉 S-38 中分离纯化得到的外切酶(CBHI), 经过木爪蛋白 关键词 质酶的有限酶解后通过一系列的柱层析分离获得其吸附结构域(CBM). 利用 纤维素 CBM 与纤维素在40 下作用24 h 后, 利用红外光谱测定纤维素结构的变化, 发 纤维素酶 现纤维素的氢键作用减弱, 利用分子动力学模拟进一步确认实验的结果, 并从纳 纤维二糖水解酶 米尺度上阐明了在CBM 分子吸附作用于纤维素表面的过程中纤维素链间的氢键 纤维素吸附结构域 作用明显降低. 本研究表明CBM 分子不仅具有使CBHI 分子定位于纤维素表面 氢键 的作用, 还会在吸附过程中导致纤维表面结构的破坏. 本研究为 CBHI 分子催化 分子动力学模拟 结构域与吸附结构域分子间的协同模型提供了一重要证据. 纤维素是自然界中重要的可再生性碳水化合物 CBMCBHI 中 3 个Tyr对结晶纤维素的有效吸附是非常 资源, 其酶解产糖过程复杂而多变. 纤维素酶吸附纤 重要的[8~10]. CBM与纤维素相互作用的位点位于纤维 维素表面是该过程中非常重要的一步[1]. 纤维素酶一 素结晶晶角处, 该处吡喃糖环的表面暴露在外, 可与 般具有两个结构域: 一个没有催化活性的纤维素吸 Tyr或Trp侧链上的苯环发生疏水作用[3,11,12]. 已有报 附结构域(CBM), 一个具有催化功能的结构域(CD), 道推测范德华力与芳香环的极化作用应是碳水化合 两结构域之间由一段连接短肽(长度33~300 氨基酸不 物与蛋白质结合过程的主要作用力[12~14], 而两者之 [2,3] [15,16] 等)相连 . 到目前为止, 已经有 130 个不同的CBM 间的氢键作用较小 . 被确定, 基于氨基酸序列的相似性分属于 13 个不同 CBM在 4 下结合纤维素的动力学研究表明第 的CBM 家族(rs-mrs.fr/CAZY/)[4]. 同一 家族CBM吸附纤维素的过程是可逆的, 而第 家 家族中的CBM一般具有结构相似性, 而不同家族的 族此过程却是不可逆的[17~20]. 由于持续性催化模式的 结构拓扑多样. CBMCBHI 是由 3 条β-折叠构成, 而 纤维素酶需要动态的吸附过程[11], 因此CBM一般认为 CBMcex 和CBMcenc则包含两条β-折叠[2,5,6]. 是介导了纤维素与纤维素酶之间构象变化. Din 等 纤维素酶的CBM一般认为协助水解不溶性结晶 人[8,9]报道一种内切酶A(CeA) 的CBM对纤维素具有非 纤维素, 通过蛋白酶水解去除CBM, 或者删除相应 水解的破坏作用, 并释放出一些小的颗粒, 该CBM 基因编码序列后, 纤维素酶对不溶性纤维素的活性