细菌转座因子的插入机制.PPTVIP

a b x y z c d x y z a b x y z c d z y x 同源序列配对 重组 扩增：转座子之间的同源重组，可使两个不同的DNA片段连接在一起，从而引起DNA的扩增。使一些原来在染色体上相距甚远的基因组合到一起，形成一个操纵子或表达单元，也可能产生一些具有新的生物学功能的基因和新的蛋白质分子。 3.极性效应 当转座因子插入到一个操纵子的上游基因时，不仅能破坏被插入的基因，而且也能大大降低位于远离启动子一端的基因的表达。 现已发现绝大多数转座因子都有极性效应，而且正、反向插入都有这种现象。 1.随机诱变 因为转座子不像质粒那样能独立存在并自主复制，因此要利用转座子进行诱变时需要先将转座子构建在适当的载体上，通常所用的载体主要是质粒。 二、转座子的应用 2.定位诱变 诱变中首先需要将转座子，如Tn5，整合在基因组上； 然后将要诱变的目的基因克隆到质粒如F质粒上； 将含有目的基因的F′质粒转入基因组已整合有Tn5的大肠杆菌中； 再与受体菌杂交进行诱变； 最后筛选突变型接合子。 第六章：细菌转座因子 1、转座因子分哪几类？它们之间有何异同？ 2、何谓复合转座子、复杂转座子？各有何特点？ 3、根据复制机制，将转座子分为哪两类？二者各有何特点？ 4、为什么说Mu噬菌体不同于一般的温和噬菌体？在应用中它与IS、Tn比较有何优点？ 5、如何利用转座子进行定位诱变？ 第六章 细菌转座因子 转座因子：是DNA分子中一段可自主改变自身座位的DNA片段，广泛存在于细菌、病毒和真核生物中。又名转位子、跳跃基因。 （1942-1983） 转移方式：可以在同一细胞内的DNA复制子间转移，也可以在一个复制子内部转移。 共同特征：插入寄主DNA后，导致基因失活；插入时在靶DNA位点产生一个短的正向重复序列。 第二类是反转座子(retrotransposon)：转座过程是以RNA为中间体，即从DNA→RNA→cDNA → DNA转座。 根据转座因子的转座机理，将转座因子分为两类： 第一类是DNA转座子(DNA transposon)：转座过程是从DNA→DNA，存在于原核生物和真核生物中，如细菌的转座子和插入序列； 第一节 细菌转座因子的类型和结构 细菌转座因子分为三个类型： 插入序列（insertion sequence IS） 转座子（transposon Tn） 转座噬菌体（Mu）。 一、插入序列 插入序列（IS）：是最简单的转座因子。长度一般为0.7-1.6 kb，在其两端含有长度为10-40bp的反转重复序列（inverted repeat sequence IR）。 插入序列的结构 两个IR之间仅含有编码转座酶（Transposnase 简称Tnp）的基因，该酶是转座所必需的，并能准确识别IS两端的序列。 转座插入的靶位点：IS插入时，在靶DNA位点产生一个3-9bp的正向重复序列(direct repeat sequence，DR) 。 IS插入目标DNA的靶序列（5bp）以及在IS两端的同向重复序列（蓝色阴影） 插入序列 长度/bp 反向重复序列长度/bp 靶位点长度/bp 在染色体中的拷贝数 IS1 768 23 9或8 6-10 IS2 1327 41 5 4-13 IS3 1400 38 3-4 5-6 IS4 1428 18 11或12 1-2 IS5 1195 16 4 11-12 表：部分插入序列的特征 插入序列的结构特点： ① 在IS的两端含有长度为10～40bp反向重复序列IR，在IS的切割和DNA链转移中起作用。 ② 大多数IS都含有一个编码转座酶的长编码区，其启动子位于一端的反向重复序列之内，而刚好终止于另一端的反向重复序列之前或之内。 ③ 在IS插入时，在靶DNA位点产生一个短的、长度一般为3-9bp正向重复序列DR，分布在IS的两侧。 由于插入序列不编码可检测的表型性状，因此根据上述IS的特点，就可进行判断和鉴定。 二、细菌转座子 细菌转座子(bacterial transposon，Tn)：带有抗性基因并能在不同的DNA分子之间移动的遗传单位。 Tn与IS的主要区别： Tn携带与转座无关的药物抗性或其他特性的基因。 （A）为Tn5，在两个相向反转重复序列之间含有抗Km、抗Ble、抗Str的基因； （B）为Tn3，在两个反向反转重复序列间除含有编码转座酶基因外，还含有解离酶基因和β-内酰胺酶基因。 转座子结构示意图 细菌抗药性转座子一般可分为两类： 复合转座子 (composite transposon) 复杂转座子 (complex transposon) 复