- 1、本文档共6页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
羧酸酯酶BioH的克隆表达及其水解活性的定向进化-浙江大学学报
浙江大学学报 农业与生命科学版
396 607~612 2013
JournalofZheian Universit A ric LifeSci
j g y g
htt www ournals zu edu cn ar
p j j g
E-mail zdxbnsb@zu edu cn DOI 10 3785 issn 1008-9209 2013 01 091
j j
羧酸酯酶BioH的克隆表达及其水解活性的定向进化
徐红娜 于洪巍*
浙江大学化学工程与生物工程学系生物工程研究所 杭州
310027
摘要 通过分子克隆手段获得大肠杆菌来源的羧酸酯酶 采用定向进化的方法提高该酶的水解活性以提升
BioH
其应用价值 通过 扩增 从大肠杆菌 菌株中克隆得到羧酸酯酶 基因 目的基因长度为 含
PCR K12 BioH 771b
p
个氨基酸 将其连接到 质粒上并转入 宿主细胞中 经诱导表达得到所需的目的蛋白
256 ET30a+ BL21DE3
p
该蛋白分子质量约为 野生型的 水解对硝基苯丁酸酯 的活性为 且该酶具有良
28 2ku BioH -NPB 18U m
p g
好的热稳定性 以 为底物进行高通量筛选 其水解底物为对硝基苯酚 在 处有最大吸收
-NPB -NP 405nm
p p
峰 挑选出水解活性提高的突变体 并通过 轮定向进化过程 成功筛选到 个水解活性提高的优良突变体 它们
2 7
的活性分别提高了 结构分析表明 突变体的突变位点均分布在远离活性中心的位置
20%~100%
文档评论(0)