3～30ku蚯蚓抗菌肽对兔巴氏杆菌病治疗效果研究.pdf

现代农业科技 2010年第 18期 动物科学 3~30ku蚯蚓抗菌肽对兔巴氏杆菌病治疗效果研究 赵 琴 李曾夏子 李文平 王 庄 (湖南农业大学动物医学院，湖南长沙 410128) 摘要 为探明3-30ku蚯蚓抗茵肽对兔巴氏杆菌病的治疗效果，试验采用体外抑茵试验及 电镜观察 ，表 明3-30ku蚯蚓抗茵肽对巴氏 杆菌有明显抑茵效果 ；动物试验 的血液 中细菌动态变化、白细胞与炎性 因子的测定和临床结果显示，蚯蚓抗茵肽对兔巴氏杆菌病 的防治效 果明显；高剂量组治愈率高达 100％，中剂量组次之 ，而低剂量组则效果不明显。 关键词 蚯蚓抗菌肽 ；兔巴氏杆菌病 ；治疗效果 中图分类号 Q965 文献标识码 A 文章编号 1007—5739(2010)18-0299-03 目前人们 已采用现代生物技术从蚯蚓中提取了多种生 L巴氏杆菌约 40个菌体 ，37℃培养 24h，3O00rm／in离心收 物活性成分，包括抗菌肽 、纤溶酶 、抗氧化物 以及抗肿瘤成 菌 ，菌体用 PBS洗涤 3次 ，洗涤后制成悬浮液 ，冰箱 4℃过 分等 】【I。研究证明蚯蚓提取物有抑菌杀菌 、促进创伤愈合、抗 夜固定。取悬浮液加在胶片上 ，干燥后，真空下溅射喷金，于 血栓 、抗肿瘤及提高机体的免疫力等功效口叫。抗菌肽对细 扫描电镜下观察菌体外观形态和结构变化。 菌、真菌、癌细胞、病毒 、原虫具有广泛的杀伤活性 ，与传统 1．4 体 内试验 的抗生素相比，具有分子量小 、广谱抗菌、热稳定性好等特 1．4．1 动物试验设计 。将 30只健康试验兔随机分为 5组 ，编 点l4_q。蚯蚓抗菌肽在抑菌等方面 的作用报道较多，如赵东 号为 1、2、3、4、5组。每组 6只，2～5组注射 0．5mL菌液 (40 红等171从蚯蚓体内分离得到抗菌肽 LumbricusI，体外试验 个菌／mL)攻毒 4h后进行处理(9]，其中 1组为正常组 (CG)， 证 明具有广谱的抗菌特性 。郑津辉等 8[J证明 了蚯蚓抗菌肽 肌肉注射生理盐水 6mL，连用 5d；2组为感染对照组 ，肌肉 对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用。但对 3～30ku 注射生理盐水 6mL，连用5d；3组为高剂量组，肌肉注射 3～ 蚯蚓抗菌肽 的研究还尚未见报道 ，试验拟采用 3～30ku蚯 30ku蚯蚓抗菌肽 6mL，连用 5d；4组为中剂量组 ，肌肉注 蚓抗菌肽对兔巴氏杆菌的抑菌作用进行研究 ，探明其抑菌 射3～30ku蚯蚓抗菌肽 4mL+生理盐水2mL，连用5d；5组 效果。 为低剂量组 ，肌肉注射 3-30ku蚯蚓抗菌肽 4mL+生理盐水 1 材料与方法 4mL，连用 5d。 1．1 试验材料 1．4．2 检测指标 。攻毒后每天观察试验兔的临床表现 ，分6、 3～30ku蚯蚓抗菌肽 ：采用超滤离心从蚯蚓体内提取获 18、32、48h进行静脉采血测定其血液中自细胞 (WBC)与嗜 得 ，蛋 白浓度为 8．82mg／L。菌种由巴氏杆菌 由中国科学院 中性细胞 (NC)的数 目，48h后所有兔处死 ，并取肺组织置 微生物研究所提供 。培养基包括普通琼脂培养基 、血清肉汤 于一80℃下，备用。 培养基等。供试仪器 ：高压灭菌锅、分光光度计 、全 自动血液 1．4．3 兔体 内细菌动态繁殖试验 。攻毒后于 6、18、32、48h 分析仪 、酶标仪 、扫描电镜 、离心机等 。供试动物 ：体重相近 采取所有兔的血液用微量接种菌落计数法进行活菌计数。 的30只健康兔，雌雄各半，约2．0kg。 1．4．4 炎性因子TNF一 和NO的含量测定。取出待测肺组织 1．2 菌种的复壮