PDE4抑制剂咯利普兰对阿尔茨海默病的抗氧化作用（可编辑）.docVIP

课 自硕士学位论文 抑制剂咯利普兰对阿尔茨海默病 的抗氧化作用 硕士研究生:卓烨烨 指导教师:徐江平教授 摘要 目的:建立大脑双侧海马注射.的阿尔茨海默病’ 大鼠模型,并采用过氧化氢 ,诱导氧化应激损伤的 细胞作为神经损伤的细胞模型,从抗氧化机制探讨咯利普兰,对 大鼠的保护作用。 方法:从在体和离体两方面来研究咯利普兰对的抗氧化作用。 在体实验: ?模型的建立及分组与给药 成年雄性大鼠大脑双侧海马注射.,造成模型后随机分为组: 假手术组大脑双侧海马注射无菌生理盐水、模型组.组、咯利普 兰低剂量组. /、咯利普兰中剂量组. /、咯利普兰高剂量组 . /。动物造模后,假手术组和模型组给予生理盐水 /,, 其余各组腹腔注射给予%无菌生理盐水配制的药物。 大鼠学习记忆能力行为学测试 大鼠注射.后,第.天进行避暗实验,第.天进行水迷宫实 验。 大鼠病理组织学观察 大鼠水迷宫实验后处死取脑,多聚甲醛溶液中避光保存做染色和尼 氏染色的病理切片。 大鼠活性氧簇与抗氧化酶系统的测定中文摘要 大鼠水迷宫实验后处死取脑,分离海马和皮层,根据试剂盒说明书检测 海马和皮层中羟自由基、超氧阴离子?、丙二醛、谷胱甘 肽、一氧化氮、超氧化物歧化酶和乳酸脱氢酶 水平。采用 法测定海马和皮层中硫氧还蛋白,Ⅸ和 诱导型一氧化氮合酶蛋白表达水平。采用 .法测定海硕士学位论文 激有较牢固的记忆。在水迷宫测试中,大鼠在水迷宫靶向获得性试验中需要更 长的时间与假手术相比才能找到平台,而咯利普兰各剂量处理组大鼠寻找 平台的时间缩短;而且,在探索性实验移去平台中,经咯利普兰各剂量干 预的大鼠在目标象限即曾经放置平台的象限空间探索的时间延长。在可 见平台测试中,各组大鼠寻找平台的时间均无显著性差异,排除了手术对动物 一般活动行为的影响。 咯利普兰对大鼠病理组织学的影响 染色:假手术组海马区神经元细胞排列整齐均匀,细胞结构完整。 模型组海马区有结构较松散的软化灶,部分神经细胞呈缺血性形态,胞体缩 小,胞核固缩,细胞数减少,胞间距离增大,神经元排列紊乱。咯利普兰各剂 量组海马区正常神经细胞数目较多,排列较密。胞核圆或椭圆形,核仁清晰, 染色质丰富,少见固缩变性的神经细胞。 尼氏染色:假手术组海马区神经元排列整齐,胞体较大、细胞层次清 晰,胞质内尼氏体数量多。模型组海马区神经元结构模糊,数目减少,神经 元排列明显疏松,皱缩成三角形或锥形,神经元胞体和树突内尼氏体溶解消失。 咯利普兰各剂量组海马区神经元排列整齐,神经元胞质内尼氏体较模型组增 多。 咯利普兰对大鼠活性氧簇与抗氧化酶系统的影响 大鼠注射后,海马和皮层抑制?和?。活性能力显著性下降妒 .,与模型组相比,咯利普兰各剂量组海马和皮层抑制?和?‘活性能力 显著性增加.,具有剂量依赖性趋势。 大鼠注射 .后,海马和皮层、和水平显著性提高尸 .,水平和活性显著性下降尸.。与模型组相比,咯利普兰 各剂量组海马和皮层中、和水平显著性降低俨.,水平和 活性显著性升高泸.,具有剂量依赖性趋势。 结果显示,大鼠注射 .后:海马蛋白表达水平 中文摘要 显著性降低,蛋白表达水平显著性升高尸.,咯利普兰各剂量组均能 显著性提高海马蛋白表达水平,降低海马蛋白表达水平尸.,具 有剂量依赖性趋势,但皮层和蛋白表达水平各组间均没有显著性差异。 结果显示,大鼠注射.后:海马和皮层 表达水平显著性差异降低, 表达水平显著性差异提高 .。咯利普兰各剂量组均能显著性提高海马 表达水平,降低海马 表达水平.,具有剂量依赖性趋势。咯利普兰./和 表达水平,降低皮层 表 ./组能显著性提高皮层 达水平尸.。 离体实验: 诱导的细胞损伤模型 倒置显微镜下观察,空白对照组细胞贴壁生长牢固,体积饱满,充分伸展, 而损伤组细胞体积明显缩小,突起消失,胞体变小,细胞间隙增大,细胞 分布变稀疏的,出现不同程度的脱壁。损伤程度随浓度的升高加深。 实验结果显示,与空白对照组相比,终浓度 /作用邑显著性降 低细胞活力.,且该浓度较温和,为适宜的浓度和作用时间。 咯利普兰对诱导氧化应激损伤的细胞的保护作用 结果显示:与正常对照组相比,终浓度 ?。作用 能显著性降低细胞的存活率.,细胞存活率为.%。不同浓度的咯利 普兰预孵均能显著性降低对细胞的毒性作用尸.,且具有浓度依赖性。 结果显示:损伤组细胞,膜外水平显著升高 .,咯利普兰 ?。与 ?。两浓度可显著性降低膜外水平 .。 流式细胞术结果显示,刺激下,/期细胞分布百分比明显升高尸 .,期细胞分布百分比明显降低.。咯利普兰和显著减少/,期细胞分布百分比尸.,增加期细胞分布百分比尸., 硕士学位论文 咯利普兰对诱导损伤细胞抗氧化保护作用 可以使细胞清除?和?。的能力明显下降.。咯利普兰各浓 度组均