HPLC法测定刘寄奴中7―甲氧基香豆素含量.docVIP

HPLC法测定刘寄奴中7―甲氧基香豆素含量摘要：目的 建立刘寄奴中7-甲氧基香豆素的含量测定方法。方法 Agela Technologies C18色谱柱，以甲醇-水-冰醋酸（52：48：4）为流动相，流速：0.8ml/min，检测波长：322nm，柱温：40℃。结果 7-甲氧基香豆素浓度在2.336～46.72ug/ml范围内，线性关系良好。回归方程为y=120.93x+7.9298，相关系数：R=1（n=6）。结论 本方法简便、准确、灵敏度高、重现性好，可用于刘寄奴中7-甲氧基香豆素的含量测定。 关键词：刘寄奴；7-甲氧基香豆素；HPLC 刘寄奴为菊科植物奇蒿Artemisia anomala S Moore的干燥地上部分。具有活血祛瘀，通经止痛，解暑止泻的功能。主治腹痛胀痛，月经不调，暑热泄泻，跌打损伤，金疮出血，痈肿。刘寄奴主产于江苏、浙江、江西等省。其含有木栓酮、β-谷甾醇、7-甲氧基香豆素、东莨菪亭、异嗪皮啶、胡萝卜苷、咖啡酸等成分[1]。因7-甲氧基香豆素具有一定的生物活性，且性质稳定。笔者对刘寄奴中7-甲氧基香豆素的含量测定进行系统探讨，得出了操作简便快速、结果准确可靠的测定方法。为充分利用本地资源、更好地控制刘寄奴药材质量，创造了很好的条件。 1 仪器与试药 安捷伦1200液相色谱仪（美国安捷伦公司），KQ100DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。7-甲氧基香豆素对照品来源于北京北研馨绿生物技术有限公司，纯度98%，含量测定用；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。 2 色谱条件与测定条件 色谱柱为Agela Technologies C18色谱柱（250mm×4.6mm，5um），流动相为甲醇-水-冰醋酸（52：48：4），流速为0.8ml/min，检测波长为322nm，柱温：40℃[2-4]。在此色谱条件下7-甲氧基香豆素与其它组分分离完全，保留时间为7.585min，理论塔板数为13195。见图1。 图1 对照品（A）与样品（B）色谱图 3 溶液的制备 3.1对照品溶液的制备 精密称取7-甲氧基香豆素对照品11.68mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为母液。取上述母液5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液[5]。 3.2供试品溶液的制备 取本品粉末（过二号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 4 结果 4.1线性关系考察 分别取母液0.25、0.5、0.75、1.25、2.5、5ml置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，吸取20ul进行高效液相测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标进行线性回归，结果标准曲线方程为y=120.93x+7.9298，相关系数R=1。表明：7-甲氧基香豆素浓度在2.336～46.72ug/ml范围内，与峰面积呈良好线性关系。 4.2精密度试验 精密吸取同一对照品溶液，重复进样6次，以峰面积计算方法测定精密度，RSD为0.47%，显示精密度良好。 4.3重复性试验 取同一批刘寄奴粉末6份，按照供试品溶液制备项下的方法操作，制得6份供试品溶液，测定并计算6份供试品溶液中7-甲氧基香豆素的含量，其RSD为0.9%。表明样品按本标准试验，重现性良好。 4.4稳定性试验 取同一批供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h进样测定，结果7-甲氧基香豆素含量的RSD为1.0%，表明样品溶液在24h内稳定。 4.5回收率测定 精密称取已知含量的同批刘寄奴粉末（含量为1.4253mg/g）6份，每份约0.25g，分别精密加入7-甲氧基香豆素对照品溶液（浓度11.68ug/ml）25ml，按上述样品溶液的制备方法和色谱条件进行平行测定，见表1。 4.6样品测定 按上述操作方法，测定8份来自不同产地的样品，外标法计算含量，见表2。 5 讨论 5.1测定波长的选择 取7-甲氧基香豆素对照品溶液，在200～400nm波长范围内进行光谱扫描，结果在322nm处有最大吸收，故选择322nm为测定波长。见图2。 图2 7-甲氧基香豆素对照品紫外扫描图 5.2流动相的选择 在对流动相的考察上，先采用甲醇-水（52：48），发现基线漂移。加入0.4%的冰醋酸溶液，分离效果不佳。进而对其比例不断的调整，至加入4%左右的冰醋酸溶液，主成分与其它杂质峰得到良好的分离，且保留时间合适，峰形良好。 5.3提取溶剂和提取方法的选择 采用甲醇、乙醇、流动相三种不同溶剂，对其提取效果进行比较，结果显示甲