Ⅰ型粘蛋白单链抗体的制备及其生物学活性的初步研究.PDFVIP

现代妇产科进展 2004 年 1 月第 13 卷第 1 期 　Prog Obstet Gynecol ,Jan. 2004 ,Vol. 13 ,No. 1 ·论著· Ⅰ型粘蛋白单链抗体的制备及其生物学活性的 初步研究 马道新 ,孔北华 ,魏 　薇 ,刘春生 ,李 　鹏 ,王文霞 , 曲 　迅 ( 山东大学齐鲁医院 ,济南 　250012) ( ) ( ) 　　【摘要】　目的 :制备 Ⅰ型粘蛋白 MUC1 基因工程单链抗体 scFv ,并对其生物学活 性进行初步研究。方法 :提取纯化 MUC1 单链抗体原核表达质粒 C31 ,使用酶切和 PCR 鉴 定 ;采用 HRP 标记的抗 E Tag 单克隆抗体进行 Western blot ,筛选表达量高的菌落 ,大量扩 增后 ,制备培养上清及胞周质中抗 MUC1 scFv ; 将 MUC1 高表达的 SKOV3 细胞铺于 96 孔 板 ,戊二醛固定后作为包被抗原 ,将制备的抗 MUC1 scFv 抗体倍比稀释后利用 ELISA 方法 检测其生物学活性。结果 : 质粒 C31 经 Sfil 酶切后为 5308bp ,经 Sfil 、Not Ⅰ双酶切后为 4522bp 和 786bp ,PCR 扩增片段为 1075bp 。Western blot 结果显示可溶性抗体为 30kD 。选 择表达量高的菌落 ,进行大量扩增、诱导表达、提取培养液上清及胞周质可溶性抗体 ,胞周 质抗体水平明显高于培养液上清 ;利用 SKOV3 作为包被抗原进行 ELISA , 当培养液上清 1 :32 、胞周质 1 :2 时所测 OD 值最高。结论 :抗 MUC1 单链抗体表达于细菌的胞周质液和 培养液上清 , 以胞周质液表达量最高;且制备的抗 MUC1 单链抗体有生物学活性。噬菌体 表面呈现技术可大量制备人 MUC1 噬菌体基因工程单链抗体 ,可用于靶向治疗。 【关键词】　基因工程抗体 ;粘蛋白类 ;酶联免疫吸附测定 ( ) 中图分类号:R730. 54 　文献标识码 :A 　文章编号 :1004 - 7379 2004 01 - 0034 - 04 Production of the singlechain variable fragment antibody of human antiMUC1 and its bio logical activity study. Ma Daoxin , Kong Beihua , Wei Wei , et al . Qilu Hospital of Shandong Uni versity , Jinan 250012 【Abstract 】　Objective :To produce human antiMUC1 singlechain variable fragment ( scFv) antibody ,and to study its biological activity. Methods :The antiMUC1 scFv expression vector C31 was extracted ,purified and certificated using enzymation and PCR methods. Western blot had been done with HRPlabeled antiE Tag antibody to determine the antiMUC1 highlyexpressed clone. Af ter amplifying the antiMUC1 highlyexpressed clone , the bacterial culture supernatant and per