基于哮喘小鼠模型探究生、制百部醇提物作用差异.docVIP

基于哮喘小鼠模型探究生、制百部醇提物作用差异 　　[摘要] 该文以OVA激发小鼠哮喘为模型，分别口服灌胃给予不同浓度生、制百部醇提取物，测定其脾细胞中Th1及Th2释放的细胞因子，采用RT-PCR技术测定实验小鼠肺组织中GATA-3及T-bet基因表达，比较生、制百部醇提取物治疗小鼠哮喘作用的差异性。结果发现与生品比较，制品给药后更能上调哮喘小鼠脾细胞中炎症因子IFN-γ（P 　　2.6总RNA提取 取实验小鼠肺组织样品按50～100 gL-1加入Trizol，按照说明书提取总RNA。 2.7一步法RT-PCR 引物β-Actin：Forword 5′-TGCTGTCCCTGTATGCCTCT-3′；Reverse 5′-TTTGATGTCACGCACGATTT-3′；GATA-3：Forword 5′ -AGGGCTACGGTGCAGAGGTA-3′；Reverse 5′-CGGAGGGTAAACGGACAGAG-3′；T-bet：Forword 5′-CCCATTCCTGTCCTTCACCG-3′；Reverse 5′-CATGCTGCCTTCTGCCTTTC-3′。 上述引物及RNA按照RT-PCR一步法试剂盒进行操作，合成DNA，取合成的DNA 2 μL进行1.5%琼脂凝胶电泳分析。 GATA-3，T-bet DNA电泳图见图3，其中β-actin为内参，对电泳图进行IOD/面积统计，结果见图4。哮喘组的GATA-3表达显著高于正常组，给药组较哮喘组均有显著的下调，制品较生品下调更显著，哮喘组的T-bet表达显著低于正常组，给药组较哮喘组均有显著的上调，制品较生品上调更显著。本实验对T-bet/GATA-3进行了数据统计，哮喘组较PBS正常组显著低，给药组均能上调该比值，制品上调显著强于生品。 3讨论 研究发现在豚鼠的体外实验中直立百部的水提液对豚鼠的支气管平滑肌有解痉作用，说明百部水煎液具有平喘作用。哮喘产生的机制十分复杂，平喘类中药治疗哮喘主要通过抗炎、抗变态反应，解除支气管痉挛及免疫调节机制实现[7]。功能改变、紊乱为基础，细胞因子在调节免疫功能，促发哮喘发病起中心作用，免疫球蛋白IgE和IgG4既是免疫功能紊乱的结果，也是促发哮喘异常反应的原因，近年来多项研究显示哮喘病人Th1/Th2比值较正常人低下，因此纠正Th1/Th2比值失衡有利于哮喘的治疗[8]。 Th1细胞释放的细胞因子主要有IL-2，IL-12，IFN-γ，IL-1，TNF等，介导细胞免疫和炎症反应，其中IFN-γ可促进Th1细胞分化，抑制Th2反应[9]，可通过诱导NO的合成气道平滑肌对异丙肾上腺素（ISO）敏感性对抗炎症细胞因子[10]，在哮喘病中是一种主要的Th1细胞因子。Th2产生的IL-4，IL-5被认为是关键的细胞因子[11]在哮喘发病过程中其表达是上调的[12]。Th1和Th2的分化方向受其特异的基因序列调控，有多种转录因子参与Th1/Th2的分化以及IL-4，IFN-γ的表达，其中GATA结合蛋白3（GATA binding protein 3，GATA-3）特异性表达于Th2细胞，促进Th0细胞向Th2细胞分化并正调控Th2细胞因子的表达。T-bet蛋白特异性表达于Th1细胞，促进Th0细胞向Th1细胞分化并正调控Th1细胞因子的表达。 百部为传统中药，常用来入药治疗咳嗽、支气管炎、哮喘等病。传统中医中主治咳嗽入药时多以制品入药，但是目前，市售百部常常存在生制不分的情况，甚至很多药店不知道有生、制2种品种。本课题组前期研究表明制品百部止咳作用要显著强于生品，本实验则以OVA诱导小鼠哮喘模型来研究生、制百部醇提物对其中脾细胞释放的细胞因子的影响，及对其中参与调控Th1，Th2的GATA-3及T-bet基因表达的影响。生、制品治疗作用比较，制品更能够显著上调IFN-γ表达及显著下调IL-5表达；对肺组织中T-bet/GATA-3测定结果表明，制百部醇提物更能上调T-bet表达，下调GATA-3表达，调节Th1/Th2比例，达到治疗哮喘的作用，制品治疗作用更显著。这就进一步证明百部进行治疗咳嗽及其相关病症时当以制品入药。 [参考文献] [1] Palombini B C， Villanova C A， Araujo E， et al. A pathogenic triad in chronic cough： asthma， postnasal drip syndrome， and gestroesophageal reflux disease [J]. Chest， 1999， 116 （2）： 279. [2] 王志虹， 林江涛， 李勇， 等. 慢性咳嗽的病因诊断及治疗效果