番茄果实ABA合成酶NCED基因的克隆及其.PDFVIP

中国科技论文在线 中国农业大学学报 　2009 ,14 (5) :5460 J ournal of China A gricult ural U niver sit y 番茄果实 ABA 合成酶 N CED 基因的克隆及其 RNAi 遗传转化体系的建立 1 1 1 2 2 王 玲 　孙 亮 　冷 平 　王永军 　徐丽哲 ( 1. 中国农业大学 农学与生物技术学院 ,北京 100 193 ; 2 . 北京市平谷区 科学技术委员会 ,北京 100035) 摘 　要 　以番茄为材料 , 根据 ABA 合成关键酶编码基因 N CED 的保守序列设计引物 ,通过 R TPCR 方法从番茄 果实中克隆了2 个 N CED 基 因片段, L eN CED1 和 L eN CED 2 。通过农杆菌介导法进一步建立 了 ‘嘉宝’番茄 L eN CED1 基因的 RN Ai 再生和转化体系 ,并研究影响番茄遗传转化的 4 个因素外植体类型 、预培养时间、激素组 合 、农杆菌侵染时间。结果表明:番茄子叶预培养 2 d ,用农杆菌 LBA4404 侵染 5 min 后 ,避光共培养 2 d ,在加入 1 mg/ L 6BA + 0 . 05 mg/ L IAA + 5 mg/ L 潮霉素的 M S 培养基上可以诱导出芽 ,转入添加 0 . 1 mg/ L IAA + 7 mg/ L 潮霉素的 1/ 2 M S 培养基上可以使芽生根 。本实验共获得 26 株抗性植株 。GU S 染色证明 ,有 9 株抗性植株成功转 入含有 N CED 基因 RN Ai 载体的 TDN A ,为深入了解 ABA 促进番茄果实成熟的机理提供了方法和材料 。 关键词 　番茄 ; N CED 基因; ABA ; 再生 ; 转化 ; RN Ai 中图分类号 　S 63 ;Q 812 　　　文章编号 (2009)　　　文献标志码 　A Cloning of ABA bio synthe si s key enzyme NCED gene from tomato fruit and it s RNA int erference genetic transformation WAN G Ling1 , SUN Liang1 , L EN G Ping1 , WAN G Yongj un2 , XU Lizhe2 ( 1. Colle ge of Agronomy and Biot e chnology , China Agricultural University , Beij ing 100 193 , China ; 2 . Municip al Scienc e and Te chnology Commis sion in Pinggu , Beijing 100035 , China) Ab stract 　We de signe d p rimers b a s e d on the c ons erve d s e quenc e of ABA biosynthe sis key enzyme gene , NCED and clone d tw o NCED gene fra gment s ( L eNCED 1 and L eNCED2) from t omat o fruit by RTPCR. Th