seminar 321 课件.ppt

* 胞内总胆固醇含量降低，200um时降低28%，剂量依赖性降低，但是对胞内游离胆固醇含量无影响 * 200uM EGCG 增多SREBP-1 的活性转录因子形式；EGCG降低SREBP-1的无活性前体形式至不可检测。1256为核提取物，3478为内质网膜 * 胞内胆固醇含量的三种方式：胆固醇合成的减少、从细胞流入培养基、转换为胆酸。包内的7-烯胆(甾)烷醇作为胆固醇合成的指标。50um时达到最低，在200uM时胞内的7-烯胆(甾)烷醇显著增多。培养基内的胆固醇浓度在50-100um时没有差异，但是200um时培养基内的胆固醇显著增多。这可以解释在这个剂量时，即使合成增多，但是胞内的胆固醇含量还是显著减少的。同时可以看出，包内的7-烯胆(甾)烷醇含量与培养基中的胆固醇含量有强烈的相关性。 7-烯胆(甾)烷醇的含量与培养基中胆固醇含量相关，说明培养基中的胆固醇含量和胆固醇合成相关。 EGCG并不影响培养基中的脱氧鹅胆酸含量，说明胞内胆固醇含量降低与胆汁酸转化无关。 * 游离胆固醇抑制SREBP前体的成熟，正常情况下，SREBP前体剪接后从内质网释放到细胞核中，与LDLR的上游结合，促进他的转录。但是给药后游离胆固醇含量变化不大，却导致LDLR表达的变化，有可能是因为HepG2细胞内游离胆固醇的调节库是不可测量的。SREBP1对胞内固醇含量十分敏感，是胞内固醇水平的参照。SREBP1的成熟体有可能因为EGCG抑制了泛素-蛋白酶体对它进行的胰凝乳蛋白酶样降解，从而聚集。KUHN等发现这些现象与SREBP-2相关，但是也可以解释为SREBP1的降解，但是在体内，更支持LDLR是受SREBP2的调控。 * Insig：胰岛素诱导基因 * 体内血浆胆固醇水平受胆固醇的生物合成、 饮食胆固醇的吸收、 胆汁的清除和排泄等几个方面的影响。 Ezetimibe 作用于小肠细胞的刷状缘 ,选择性地抑制食物及胆汁来源胆固醇的吸收而不影响胆固醇酯、 甘油三酯、 牛磺酸和脂溶性维生素的吸收。 14C标记的ezetimibe 吸收后进入肝肠循环并被广泛糖脂化 ,ezetimibe 及其糖脂化代谢产物反复作用于胆固醇吸收部位 ,发挥持久的胆固醇吸收抑制作用 * 进一步支持NPC1L1在人体中的分布，选用典型肠上皮细胞Caco-2和保留人肝细胞特性的HepG2细胞，观察NPC1L1在这两种细胞中的基因表达。可以看出，在HepG2细胞中NPC1L1的表达水平要高很多，而且在LDL-C的存在下， NPC1L1的表达也会轻微的增加。 * 因为在Caco-2和HepG2细胞可以表达足够量的NPC1P1的mRNA，所以用这些细胞的细胞裂解液进行WB分析，可以看出在HepG2细胞中NPC1L1的表达水平要高很多，但是在免疫原peptide的存在下，这个信号就被完全封闭了。免疫荧光等分析表明他定位于富含 GTPase Rab5的亚细胞囊泡中 * 高胆固醇膳食喂养NPC1L1/ and NPC1L1缺失 mice14周。对血浆脂质水平、肝和胆囊的组织化学分析。表明在低胆固醇饮食情况下，这两种小鼠的各项指标没有显著差异。高胆固醇膳食时，NPC1L1/ 小鼠的胆固醇和LDL显著上升，甘油三酯下降而HDL与低胆固醇喂养时差别不大。而NPC1L1缺失 小鼠在高胆固醇膳食喂养时，胆固醇和LDL没有增加，反而胆固醇降低，HDL降低，而甘油三酯与低胆固醇喂养时差别不大。同时，与NPC1L1/ 相比，在高胆固醇膳食时， NPC1L1缺失 小鼠的葡萄糖含量显著降低，而NPC1L1/ 的葡萄糖含量却又少量但显著的增加 * NPC1L1/小鼠的很大，而且有很多脂质堆积，而NPC1L1缺失 小鼠的肝却比较小，比较正常，说明他们可以抵抗膳食诱导形成的脂肪肝。HE切片表明NPC1L1/小鼠的肝有明显的脂质堆积。而且胆囊也存在脂质诱导的胆汁阻塞。 Modulation of Cholesterol Metabolism by the Green Tea Polyphenol (?)-Epigallocatechin Gallate in Cultured Human Liver (HepG2) Cells CHRISTINA A. BURSILL AND PAUL D. ROACH J. Agric. Food Chem. 2006, 54, 1621?1626 1621 INTRODUCTION 高胆固醇血症是动脉粥样硬化的重要危险因子。 流行病学显示饮用绿茶可以降低血浆胆固醇浓度。 动物干预性研究发现绿茶和绿茶提取物可以降低胆固醇，并且抵抗动脉粥样硬化。 绿茶富含儿茶精等多酚类物质，有四种主要类型：EC EGC ECG EGCG，其中EGCG占