新城疫病毒诱导宿主细胞应激颗粒形成机制的初步探究Preliminary study on the formation mechanism of stress particles in host cells induced by Newcastle disease virus.pdfVIP

万方数据 Anhui Agricultural University Dissertation for the Masterate The Preliminary Research on Mechanism of Host Stress Granules Induced by Newcastle Disease Virus Candidate: Wang Xiaoxu Supervisor: Prof. Wang Guijun Cooperant Supervirsor: Prof. Ding Chan Academic Degree applied for: Master of Agriculture Speciality: Preventive Veterinary Science Research field: Infectious diseases of domestic animals College: Animal Science and Technology College May, 2014 万方数据 万方数据 中文摘要 新城疫病毒由单链的负股RNA 构成，隶属于副粘病毒科。新城疫病毒可以 导致禽类出现严重的呼吸系统、神经系统和肠道的疾病，并且具有高度的传染性 和死亡率，经常造成重大的经济损失，从而严重威胁畜牧产业。尽管如此，新城 疫病毒也被发现对人类一些疾病就有治疗作用，其中最主要的当属新城疫病毒的 溶瘤特性。新城疫病毒作为溶瘤因子的应用已经在黑色素瘤、结肠癌、肾癌的治 疗中作为辅助性免疫治疗药物取得了一定的疗效。 应激颗粒（Stress Granules;SGs ）是当哺乳动物细胞遇到环境压力时可以迅 速形成一种可逆的动态结构，它能够将细胞中的起始复合物的聚集到一起，从而 降低细胞整体的翻译速率。应激颗粒作为一个临时储存库来存放这些复合物，而 当压力刺激解除时，这些翻译复合物可以迅速被释放并恢复蛋白质的合成，从而 恢复细胞内稳态。应激颗粒的形成可以促进细胞在压力环境下的生存几率，尤其 是当病毒感染细胞时，应激颗粒的产生理论上可以抑制病毒的复制，从而防止其 他细胞受到侵害。然而作为需要完全依赖宿主翻译系统完成自身复制的专性寄生 的病毒，也有许多病毒进化出了相应的机制抵制细胞的应激颗粒对翻译水平的调 控。应激颗粒除了在降低细胞翻译水平发挥作用以外，也被证实与细胞中先天性 免疫相关模式识别受体以及肿瘤细胞中 mTORC 通路的超活化的抑制存在着紧 密的联系。 本研究通过对应激颗粒的两种标志性蛋白的间接免疫荧光检测，以及其形成 途径中蛋白磷酸化水平的WB 检测，旨在验证新城疫病毒是否能够诱导HeLa 细 胞产生应激颗粒，并且通过对不同时间点的检测验证新城疫病毒与应激颗粒之间 的关系。结果表明，新城疫病毒可以诱导HeLa 细胞产生应激颗粒，并且在病毒 感染的进程中应激颗粒持续性存在于细胞之中，这种情况目前仅在呼吸道合胞体 病毒的感染过程中有报道。为了进一步验证应激颗粒的产生对新城疫病毒复制水 平的影响，本研究又通过设计干扰RNA 抑制应激颗粒的产生，从而检测病毒的 复制水平，及病毒蛋白在mRNA 水平的表达情况。结果表明，在干扰了应激颗 粒形成之后，病毒的滴度、病毒蛋白的复制水平以及病毒蛋白mRNA 水表达平 均显著下降。由此可见，应激颗粒的形成有利于新城疫病毒在HeLa 细胞中的复 制。