第二章分光光度法的.ppt

分光光度法 1概述 2朗白比尔定律 3显色反应 4显色剂 5测量误差及测量条件 6示差分光光度法 7分光光度计 第一节 分光光度法概述 1、电磁辐射 光是电磁辐射。电磁辐射具有粒子的性质，也具有波动的性质，其波动性可用波长（?）来表示。所谓波长即指在波传播路线上具有相同振动位相的相邻两点之间的距离。电磁辐射的粒子性的主要特征是每个光子具有能量?，其与波长之间的关系为： ?＝ｈ?ｃ/λ 。 电磁辐射按波长顺序排列，称为电磁波谱 ? 3、比色法和吸光光度法 ? 利用比较溶液颜色深浅的方法来确定溶液中有色物质的含量，这种方法就称为比色分析法。用眼睛观察比较溶液颜色深浅来确定物质含量的分析方法称为目视比色法。利用光电效应测量通过有色溶液后透过光的强度，求得被测物质含量的方法称为光电比色法。 ? 分光光度法是以棱镜或光栅为分光器，并用狭缝分出很窄的一条波长的光，并同样测量透过光的强度来求得被测物质的含量；由于光的波长范围窄，其测定的灵敏度，选择性和准确度都比比色法高。 第二节 朗伯－比尔定律及其影响因素 ? 1、朗伯－比尔定律 实验发现透过光强度与有色溶液中吸收物质的分子数量c以及透过溶液的厚度L有关。其数学表达式如下： -log Ⅰt/Ⅰo =kcL 其中k为比例系数，其数值只取决于吸光物质的特性，而与吸收层厚度及浓度无关。式中又称为吸光度A，上式又可写为A＝kcL； 上式称为朗伯－比尔定律，是紫外－可见吸收法定量分析的基础。 第三节 显色反应及其影响因素 ? 1、测量误差 许多误差来自吸光度的定量测定。光度测定过程包括两个阶段：第一阶段是化学过程，即利用各种化学反应将待测组分的溶液用适当的试剂处理，使待测组分转变为一定组成的化合物，包括有色化合物及各种络合物；第二阶段是物理过程，即将经第一阶段处理的样品置于仪器中测定吸光度或绘制吸收光谱。因此，测定过程中的误差可以分成:? 化学误差? 仪器的误差?? 人为的误差 ? 2、测量条件的选择? pH值的选择 在分光光度法的定量分析中，为了选择确定最适宜酸度，考虑到酸度值往往是最主要的影响因素，可用单因素实验法。常用的方法是：将具有不同pH值但含有同一量的被测物质的一系列溶液，于分光光度计上测量其相应吸光度值，然后以吸光度对溶液的pH或酸度作图，得一酸度曲线。该曲线中吸光度值最大且保持不变的区间所对应的pH值范围，即为待测物质分光光度测定的最适宜酸度范围。 ?入射光波长的选择 根据朗伯—比耳定律可知，在一定波长下，如果液槽厚度保持不变，则溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。 A＝-log 1/T=εcL  在实际应用中，通常借助吸收曲线来选择测定的适宜波长。所谓吸收曲线，就是使不同波长的光透过某一固定浓度的溶液，测量其吸光度。然后，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图。所得曲线称为吸收曲线。吸光度值最大时的波长以λ最大表示，此波长即为测定时所选用的入射光波长，此时的摩尔吸光系数最大，测定灵敏度最高。但有时为避免干扰，不选择最大吸收波长，而选择其次的吸收峰为工作波长，这样虽然灵敏度不是最高，但能避免干扰，提高了方法的选择性。 ?参比溶液的选择 2、示差法的误差 第七节 分光光度计 仪器的装置原理 单光束装置 双波长分光光度计原理示意图 谢谢 请指正 W W W . W A T S O N W Y A T T . C O M Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 波谱区名称 ?射线 X射线 远紫外光 近紫外光 可见光 近红外光 中红外光 远红外光 微波 射频 波长范围 0.005～0.14nm 0.0001～10nm 10～200nm 200～400nm 400～750nm 0.75～2.5?m 2.5～50?m 50～1000?m 0.1～100cm 1～1000m 频率范围(MHZ) 6×1014～2×1012 3×1014～3×1010 3×1010～1