报春苣苔抗性研究实验报告毕业论文.docVIP

 PAGE 12  PAGE 4 报春苣苔抗性研究实验报告 专业班级：11园艺（技术教育） 学生姓名：高其森 指导教师：马崇坚 副教授 1 前言 1.1 研究目的和意义 报春苣苔属于报春苣苔属苦苣苔科的一种国家一级保护植物，其药用和潜在作用巨大有待开发，作为一种频临灭绝的植物本课题通过研究其抗性机制，培育抗性更强的品种为创造更适合苦苣苔作准备另外也为保护其种质资源。 1.2 报春苣苔生物学特征与自然繁殖环境 报春苣苔是苦苔科多年生喜钙植物,花期在每年3月到5月，因其量极其稀少因此被列为国家一级保护野生植物。由其生长特性决定其生长环境，报春苣苔一般生长在山洞口的植物群落中，这些群落植物中绝大部也是喜钙和阴凉植物，最常见的伴生植物是苔藓，报春苣苔相对洞口其他植物分布有些特别，在一定程度上洞口越深其他植物越来越少而报春苣苔却越来越多,洞口的报春苣苔植株比洞内植株长势要好很多,洞口处报春苣苔呈独立簇状花梗很长，叶片茂盛洞内却很多是独立小植株生长极其缓慢，开花比例洞口的比例要大。从其生长环境分析得出报春苣苔生长需要偏碱性土壤，耐旱耐贫瘠能力极强，在有机质含量丰富的地方长势很好。其植物的生长极为缓慢,平均每株年生长量在30-50g，生长只需微弱的光强。 2 材料与方法 2.1 叶绿素测定材料与仪器 2.1.1材料 不同年龄，生长状态，不同科的苦苣苔。 2.1.2主要仪器与试剂 叶绿素测定仪，天平，皮尺，霍格兰栽培营养液 Nacl Na2 Co3  HYPERLINK \l _Toc199822657 2.1.3实验设计 设计方法主要是控制变量法。叶绿素含量变化主要通过测定栽培前与栽培一定时间后每隔15天测定一次次来对比叶绿素含量的变化，测定方法是直接用叶绿素测定仪测量每株报春苣苔的同一位置，一株一般选三个位置测量，位置均匀分布在植株上中下部以免减少误差。植株的生长量测定也是对比栽培前后的植株体重变化量，一般直接用天平测量，每30天测量一次。存活率主要统计最后存活的株数与开始时栽培的数比。 2.2 超氧化物歧化酶（SOD）与过氧化物酶（POD）含量的测定 均按照南京建成生物研究所生产的SOD，POD测试试剂说明进行测定 2.3可溶性蛋白含量的测定 考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，与蛋白质结合呈现蓝色。在一定范围内，溶液在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量呈正比，可用比色法测定。 2.3.1材料、仪器设备和试剂 1.材料：报春苣苔 2.仪器设备：722型分光光度计、分析天平、具塞试管、刻度试管、离心机 3.试剂：考马斯亮蓝G-250（称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶解于50mL95%乙醇中，加入100mL85%（W/V）的磷酸中，用水定容至1000mL，过滤，此药品试剂常温下可保存30d），标准蛋白质溶液（精确称取结晶牛血清蛋白10mg,加水溶解并定容至100mL，即为100ug/mL的标准蛋白质溶液），磷酸缓冲液（pH7.0）。 2.3.2操作步骤 1.标准曲线的制作 取6支具塞试管，按表加入试剂。盖上塞子，摇匀。注意：各管震荡程度尽量一致。放置3min，在595nm波长下比色测定，比色反应在1h内完成。以牛血清蛋白含量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘出标准曲线。 2.样品中蛋白质含量的测定 准确称取约200mg植物组织叶片，放入研钵，加5mL磷酸缓冲液（pH7.0），在冰浴中研成匀浆。再在4000r/min离心10min，将上清液倒入10mL容量瓶。再向渣中加入2mL磷酸缓冲液，悬浮，4000r/min离心10min。合并上清液，定容至刻度。 另取1支具塞试管，准确加入0.1mL样品提取液，加入蒸馏水0.9mL和5mL考马斯亮蓝G-250试剂，其余操作与标准曲线制作相同。 2.4 丙二醛（MDA）含量的测定 2.4.1 仪器设备 紫外可见分光光度计、离心机。 2.4.2 操作方法 MDA的提取：称取剪碎的受胁迫的新鲜样品1.0，加入10%三氯乙酸（TCA）2ml和少量石英砂，研磨至匀浆，再加8ml三氯乙酸（TCA）进一步研磨，匀浆以4000r/min离心10min，上清液为样品提取液。 显色反应和测定：吸取离心的上清液2ml（对照加2ml蒸馏水），加入2ml 0.6%硫代巴比妥酸（TBA，用10ml三氯乙酸配制）溶液，混匀物于沸水浴上反应15min，迅速冷却后再4000r/min离心15min。取上清液测定532、600、450下的消光度。 2.4.3 含量计算 双组分分光光度计法：根据郎伯-比尔定律：D=CL，当液层厚度为1时，=DC，称为该物质的比吸收系数。当某一溶液中有数种吸光物质