兽医临床诊断学（卞建春）实验7 血液常规检验（一）.docVIP

实验七 血液常规检验（一） 一、目的要求 1．掌握血液的采集、抗凝和处理。 2．掌握红细胞沉降速度、血红蛋白、红细胞压积容量、红细胞计数及白细胞计数的操作方法。 二、实验内容 （一）血液样品的采集 供检验用的血液样品，一般采集静脉血，大动物可采集多量的血液，而小动物和实验动物的采血量少，只能根据检验的目的、动物种类和病情酌定采血量。一般根据检测项目的方法和对标本的要求不同，临床检验采用的血液标本分为全血、血清和血浆。全血主要用于血细胞成分的检查，血清和血浆则用于大部分临床化学检查和免疫学检查。各种动物的采血部位见表7-1。 表7-1各种动物的采血部位 采血部位 畜种 采血部位 畜种 颈静脉 马、牛、羊 耳静脉 猪、羊、犬、猫、实验动物 前腔静脉 猪 翅内静脉 家禽 隐静脉 犬、猫、羊 脚掌 鸭、鹅 前臂头静脉 犬、猫、猪 冠或肉髯 鸡 心脏 兔、家禽、豚鼠 断尾 猪、实验动物 （二）血液的抗凝 采集全血或血浆样品时，在采血前应在采血管中加入抗凝剂，制备抗凝管。如用注射器采血，应在采血前先用抗凝剂湿润注射器。常用的抗凝剂有： 1．草酸盐与血液中钙离子结合形成不溶性草酸钙而起抗凝作用。1ml血液用2mg草酸盐即可抗凝。常用的草酸盐为草酸钾、草酸钠等，配成10%溶液，根据抗凝血量加入试管或玻瓶中，置45-55℃（不超过80℃）烘箱内烤干备用。此抗凝剂不适宜钾、钠和钙含量的测定，并且能使红细胞缩小6%，故也不适宜红细胞压积容量的测定。临床上一般用草酸盐合剂，配方为草酸钾0.8g、草酸铵1.2g，加蒸馏水100ml溶解，取此液0.5ml加入试管或玻瓶中，可抗凝5ml血液。此抗凝剂能保持红细胞的体积不变（草酸铵使红细胞膨胀，草酸钾使红细胞皱缩），适用于血液细胞学检查，但不适用于非蛋白氮、血氨等含氮物质和钾、钙的测定。 2．枸橼酸钠：与血液中钙离子形成非离子化的可溶性钙化合物而起抗凝作用，溶解度和抗凝度较弱，5mg可抗凝1ml血液。使用时配成3.8%溶液，0.5ml可抗凝5ml全血。主要用于红细胞沉降速率的测定和输血，一般不作为生化检验的抗凝剂。 3．乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）：与钙离子形成EDTA-Ca螯合物而起抗凝作用，1ml血液需1-2mg，常配成10%溶液，取此液2滴加入试管或玻瓶中，置50-60℃干燥箱中烘干备用，可抗凝5ml血液。该抗凝剂对血细胞形态影响很小，常用于血液学检验。 4．肝素：主要是抑制凝血酶原转化为凝血酶，使纤维蛋白原不能转化为纤维蛋白。0.1-0.2mg或20IU（1mg相当于126IU）可抗凝1ml血液，常配成1%溶液，加入试管或玻瓶后在37℃左右烘干备用，适用于大多数实验诊断的检查。缺点是白细胞的染色性较差。 （三）血样的处理 如分离血清，应将全血采集在试管中（不加抗凝剂），在室温下或25-37℃温水中斜置，血清析出后即可分离。血浆应在抗凝血采集后离心分离。血液采集后应尽快送检和检测。不能立即送检的血样，血片应固定，抗凝血、血浆和血清应冷藏。送检血样应编号，并避免剧烈振摇。血液学检查项目与血样保存的期限见表7-2。 表7-2血液学检查项目与采血后可保存的时间 检查项目 保存时间（h） 检查项目 保存时间（h） 白细胞计数 2—3 血红蛋白含量 48 红细胞计数 24 红细胞压积容量 24 血小板计数 1 红细胞沉降速率 2—3 网织红细胞计数 2—3 白细胞分类计数 1—2 ? （四）细胞沉降速度的测定 红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate, ESR，简称血沉率）是指在室温下观察抗凝血中红细胞在一定时间内在血浆中的沉降速率。测定血沉率的方法很多，兽医临床上常用魏氏（Westergren）法。 1．原理红细胞沉降速度（erythrocyte sedimentation rate ,ESR）与红细胞串钱状的形成、红细胞数目的多少、血浆蛋白的组成以及测定时室温的变化、血沉管倾斜的程度等因素有关。 2。器材与试剂 （1）魏氏血沉器、采血针头等 （2）抗凝剂：3.8％枸橼酸钠液 3．操作方法 魏（Westergren）氏法魏氏血沉管长30cm，内径为2.5mm，管壁有200个刻度，每个刻度之间距离为1.0mm，附有特制的血沉架（图7-1）。测定方法如下： （1）取3.8％枸橼酸钠液0.4ml置于小试管中。 （2）自颈静脉采血，沿管壁加入上述试管，轻轻混合。 （3）用血沉管吸取抗凝血至刻度0外，用棉花擦去管外血液，直立于血沉架上。 （4）经15、30、45、60 min，分别记录红细胞沉降的刻度数，用分数形式表示（分母代表时间，分子代表沉降mm数）。 4．注意事项 （1）血沉管必须垂直静立（牛、羊的血液，血沉速度很慢，可倾斜60°，