细胞分子生物学（扬州大学）第六章 DNA损伤、修复与重组.pptVIP

第六章 ＤＮＡ损伤、修复和重组 第一节 突变 一、定义 突变：是指DNA碱基序列的可遗传、永久性改变，包括最简单的点突变和插入或缺失 2. 发生原因： DNA复制或减数分裂重组过程中的自发性错误（自发突变） 物理和化学因素引起的DNA损伤（诱发突变） 二、点突变 单个碱基的改变，是最简单的一种突变 转换：嘌呤与嘌呤或嘧啶与嘧啶之间的互换 颠换：嘌呤与嘧啶或嘧啶与嘌呤之间的互换 三、点突变的表型改变 沉默突变:发生在DNA非编码区、非调节区或某些密码子的第三位碱基，对编码的氨基酸不产生影响，无表型改变 错义突变:发生在编码DNA序列，导致相应氨基酸的改变，其表型改变视具体情况而定，既可无明显影响，也可能是致死性的 无义突变：发生在编码DNA序列，导致新的（不成熟）终止码形成，经常导致蛋白质翻译提前终止 四、插入与缺失 定义：DNA中添加或丢失一个或多个核苷酸 表型改变：导致突变C端一侧氨基酸序列的完全改变，即所谓的移码突变 五、复制的忠实性 定义：生物体通过复杂而精确的机制保证世代交替过程中遗传信息的稳定，如大肠杆菌DNA复制过程中的自发突变率仅为10-1０ 分子机制： DNA聚合酶严格按Watson-Crick碱基配对规则合成DNA DNA聚合酶的3 5 校正外切酶活性能识别并修正DNA复制过程中偶然发生的错误 DNA后随链的合成以RNA为引物 细胞内存在错配修复等机制 六、诱变剂 定义：能引起DNA损伤和导致突变发生的理化因素 分类： 物理诱变剂： 高能离子化辐射，如X射线和γ射线，能导致DNA链的断裂和糖、碱基的破坏 非离子化辐射：紫外线能引起相邻碱基的嘧啶二聚体形成 2.化学诱变剂： 碱基类似物：引起直接诱变 亚硝酸：使胞嘧啶脱氨基，产生尿嘧啶和鸟嘌呤类似物 烷化剂和芳化剂：通过间接诱变引起DNA损伤 嵌入剂：引起插入和缺失突变 七、诱变 直接诱变:由DNA碱基配对特性改变引起的未经修复的碱基错误，产生的暂时性错误在复制后作为突变固定下来 2.间接诱变:当化学和物理诱变剂引起的DNA损伤不能被有效修复时，DNA聚合酶可跨过损伤部位进行DNA复制，将碱基插在未修复损伤部位的对侧，使子链产生间接突变 第二节 DNA损伤 一、自发性DNA损伤 DNA复制错误: DNA复制是严格而精确的事件，但也可能发生错误（如前所述） 2.自发性化学变化：生物体内DNA分子可因各种原因发生变化，主要有以下类型： 碱基异构互变：DNA中4种碱基异构体间都可自发地相互变化（如烯醇式与酮式间的互变），导致碱基配对错误，如发生在DNA复制时，就会造成子代DNA的错误性损伤 碱基脱氨基作用：碱基的环外氨基有时会自发脱落，导致胞嘧啶转变成尿嘧啶、腺嘌呤转变成次黄嘌呤（H）、鸟嘌呤会转变成黄嘌呤（X），在DNA复制时，U与A配对、H或X与C配对，导致子代DNA序列的错误 脱嘌呤与脱嘧啶：自发的水解可使嘌呤和嘧啶从DNA链的核糖磷酸骨架上脱落,长寿的哺乳类细胞（如神经细胞）在整个生活期间自发脱嘌呤数约为108 碱基修饰与链断裂：细胞呼吸的副产物O2-、H2O2等会造成DNA损伤，产生的胸腺嘧啶乙二醇等碱基修饰物可能引起DNA单链断裂，体内还可发生DNA甲基化等结构变化，这些损伤的积累可能导致细胞老化 二、诱发性DNA损伤 氧化损伤: 在生理状态下，所有需氧细胞中都存在能引起DNA氧化损伤的超氧化物、氢过氧化物和羟自由基等活性氧分子（ROS） 2. 辐射损伤： 高能离子化辐射（X-射线和γ-射线）可导致目标分子电子丢失，引起DNA链断裂以及碱基、戊糖破坏 非离子辐射（紫外线）能导致新化学键的形成, UV能使相邻嘧啶碱基形成二聚体 3.烷基化作用：带有活泼的烷基，能通过烷基置换取代其它分子的氢原子 碱基的烷基化可导致DNA断裂、缺失或错配 4.脱氨基作用:亚硝酸使胞嘧啶脱氨基成为尿嘧啶，在DNA复制过程中尿嘧啶与腺嘌呤配对，复制后导致G.C→A.T的转换; 腺嘌呤脱氨基成为次黄嘌呤，后者是鸟嘌呤类似物，往往导致A.T→G.C的转换 5.嵌入剂插入:一些扁平的稠环分子可插入到DNA分子碱基对之间，造成核苷酸的插入或缺失，结果导致移码突变 第三节 DNA修复 一、光复活作用 DNA光解酶具有吸收蓝光的附属基团，在可见光作用下能切除环丁烷嘧啶二聚体的环丁烷环，使损伤的DNA恢复原有结构 光复合反应是嘧啶二聚体特异的DNA修复机制，能直接无误地逆转DNA的损伤 二、烷基置换 以直接逆转方式进行的无误修复，大肠杆菌在低浓度烷化剂诱导下能产生一种适应性反应，以增强对高剂量烷化剂的致死效应 烷基转移酶能将O６－烷基鸟嘌呤的烷基转移到酶蛋白上，以自身灭活为代价进行DNA修复 哺乳动物细胞烷基转移酶的修复作用涉及DNA糖苷水解酶的诱导，再通过剪切修复机制去除烷基化