液相色谱定量基础知识.pptVIP

第三部分 定量基础知识 定性确证 仅仅通过保留时间并不能完全确证该物质 定量分析的基本要求 需要有纯物质作标准 被定量组分峰要与其它峰达到基线分离 符合定性参数要求 选择合适的定量方法 常用定量方法 面积归一化 外标法 内标法 标准加入法 面积归一化法 公式： 外标法 单点校正法 当被测试样中各组分浓度变化范围不大时，可不必绘制多点的标准曲线，而用单点校正法（比较法）。配制一个和被测组分含量接近的标准溶液，定量进样，根据被测组分和外标组分峰面积比或峰高比计算被测组分的含量。 内标法 内标法 内标法特点 特点： 进样量不严格要求 只对所测组分作校正 必须在样品中加一内标组分 操作较为繁琐 选择内标物比较困难 选择内标物应注意 理化性质与待测物相近 在样品中不存在且不与样品中组分发生化学反应 内标物与待测物响应相近 与待测物有良好的分离，但又不能相距太远 与待测物的峰面积比为0.7-1.3最好，因此要根据待测物的浓度确定内标物的添加量 标准加入法 标准加入法特点 定量计算常用术语 Integration parameters ：积分参数，规定计算出峰面积的方法。 Identification ： 定性参数，保留时间及允许误差 Quantification method： 定量方法，选择定量方法(外标法,内标法等) Curve fit Type： 　　 　曲线拟合类型，包括线性、二次方程等 Compound table：　 　化合物表，定义要进行定量计算的组分，其中　 　　　　　　　　　　 包括定性和定量参数。 定量计算常用术语 Sample Type：样品类型，规定该数据的计算类别 Standard：标样， 浓度已知的标准品，用来制作标准曲线 Unknown：未知样，浓度待测的目标组分， Sample Amt.：样品量, 待测样品的原始称样量, 在计算结果中会除以该数值 Dil. Factor：稀释因子,待测样品的稀释倍数，在计算结果中会乘以该数值 ISTD Amt.：内标量，内标组分的添加量 Level：样品浓度水平，规定数据的浓度级别， Unknown为0， 　 　　　　 Standard为整数，浓度由低到高依次为1、2、3、4、5… … 　 Peak Table： 峰表，所有积分结果的列表 数据处理参数 积分参数：（Width, Slope, Drift, T.DBL等） 定性参数：保留时间及允许误差（时间窗，时间带） 定量参数： 基本积分参数 Channel：通道，指定检测器检测信号的通道 Width：半峰宽，峰的半高宽，排除峰宽小于最小峰宽的峰 Slope：斜率，用来判断出峰起点、终点以及滤除低平噪声 Drift：漂移，判断相邻峰的积分方式 设定值为0时，积分仪将自动判断 如Drift与基线至峰谷连线较接近时，积分面积值可能变化较大 T.DBL：时间变参，根据时间自动改变峰宽和斜率 Minimum area：最小峰面积，排除面积小于该值的峰 Slope的设定 Drift值的设定(手动校正) Ｔ.DBL的设定 T.DBL：时间变参，根据时间自动改变峰宽和斜率 等度洗脱时，出峰时间越长，峰越宽 设定值为0时，根据宽度自动判断 默认值为1000，此时该参数不起作用 定性参数 定性参数 定量参数 定量参数 影响定量结果的因素 保留时间的重现性（对GPC影响很大） 样品问题（杂质、溶剂、稳定性、配制） 进样问题（准确度和精密度） 检测器的性能（影响线性、检出限、灵敏度） 方法的可靠性 积分参数的设定 * * * * * * Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited 定性方法 色谱峰的定性鉴别 通过保留值(通常是保留时间)进行定性 需要指定保留时间误差范围（时间窗、时间带） 在相同的分析条件下 保留时间相同并不肯定是同样的组份 保留时间不同肯定不是同样的组份 通过加入标准物确认 通过改变色谱条件确认 光谱和质谱信息也可以作为进一步确证手段 其他仪器方法确证 定量分析基本公式 Ci= fi Ai Ci= fi Hi 在某些条件限定下，被测组分的浓度与检测器的响应值成正比的关系。（蒸发光散射检测器浓度与峰面积不成线性，分别取对数后成线性 ） Ci： 组分浓度, fi : 响应因子，与组分的物理化学性质和检测器的性质有关 Ai： 组分响应面积 Hi： 组分响应高度 实际修饰公式： Y=aX+b 特点： 无需做校正，简便，快速 进样量不严格要求 要求所有组分都流出并且被检测到 要求所有组分的响应因子相当 不能