梗阻性黄疸大鼠血清IL-6、TNF-α及肝脏Kuppfer细胞CD14表达变化.pdf

山东医药2013年第 53卷第 47期 梗阻性黄疸大 鼠血清 IL一6、TNF一及肝脏 Kuppfer细胞 CD14表达变化 张金敏，郑世华，仝巧云 (三峡大学第一临床医学院，宜昌市中心人民医院，湖北宜昌443003) 摘要：目的 观察梗阻性黄疸 (0J)大鼠血清IL-6、TNF一0【及肝脏 Kupp~r细胞 CD 表达变化 ，探讨黄疸性肝损 伤的免疫机制。方法 将60只成年雄性SD大鼠随机分为三组各20只，其中黄疸组结扎切断胆管制备 oJ模型， 假手术组仅行胆管分离而不结扎切断，对照组不行特殊处理。三组均于7d后留取下腔静脉血及肝组织标本，采用 EHSA法检测血清 IL-6、TNF-仪水平，采用免疫组化法检测肝脏CD 表达。结果 与假手术组及对照组比较，黄疸 组血清IL_6及TNF-d均显著升高(P均0．05)、肝脏Kupp~r细胞CD 表达明显增多(P0．01)，前两组比较无显 著差异 (P0．05)。结论 0J大鼠肝脏 Kupp~r细胞被激活、CD。表达增强并导致炎症因子血清 IL_6及TNF．大 量表达，此可能为 0J引起肝损伤及机体免疫功能下降的机制之一。 关键词：梗阻性黄疸；白细胞介素6；肿瘤坏死因子 ；Kupp~r细胞；CD doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2013．47．Ol1 中图分类号：R392．11；11575．7 文献标志码：A 文章编号：1002-266X(2013)47-0030~3 黄疸患者免疫力低下，易发生内毒素血症、肠黏 组织以4％多聚甲醛固定，制备石蜡切片。 膜屏障功能障碍、肝肾功能不全甚至多器官衰竭，病 1．4 血清 IL-6及TNF一仅水平测定 将下腔静脉血 死率高¨ J。内毒素受体 CD 是机体免疫反应过 低温高速离心 (3000r／min，4oC，10min)，取血浆， 程中的关键因素之一，能识别血中的内毒素脂多糖 采用ELISA法测定血清 IL-6及TNF．质量浓度。 (LPS)并与其结合，从而诱发免疫细胞的一系列信 1．5 肝脏 Kupp~r细胞CD 表达检测 取上述肝 号转导过程，诱导 IL-6、TNF-仪等细胞因子的表达， 脏组织石蜡切片进行脱蜡、脱水处理，以1：200的兔 产生炎症瀑布效应 J。2012年9月，我们建立了梗 抗大鼠CD 多克隆抗体为一抗 ，以HRP标记的羊抗 阻性黄疸 (oJ)大鼠模型，观察了其血清 IL-6、TNF-仅 兔 IgG抗体为二抗进行免疫组化检测，通过显微图 水平及肝脏 Kupp~r细胞CD，的表达变化，旨在探 像分析技术，测定 CD 阳性反应物 (CD 为细胞膜 讨黄疸性肝损伤的免疫机制。 着色，呈棕黄色，主要表现为肝窦边缘及汇管区的星 1 材料与方法 形细胞即Kupp~r细胞阳性表达)的平均积分光密 1．1 材料 实验动物：清洁级雄性SD大鼠6O只， 度值 (IOD／area)，其中IOD为待测定区域阳性染色 体质量 320～360g，购 自华中科技大学同济医学院 的积分光密度，area为待测定区域的面积，每张切片 实验动物中心。主要试剂：大鼠IL-6和TNF一仅酶联 随即选取5个视野，取其平均值。 免疫试剂盒为美 国RapidBio公司产品，兔抗大 鼠 1．6 统计学方法 采用SPSS13．0统计软件。计量 CD 多克隆抗体购 自武汉博士德生物工程有限公 资料以 ±s表示，两组间比较用成组t检验，多组间 司。 比较采用单因素方差分析。P≤0．05为差异有统计 1．2 动物分组及 OJ模型制作 将 60只大鼠随机 学意义 。 分为三组各20只，其中黄疸组术前禁食 12h、禁水 2 结果 ’ 4h，3％戊巴比妥钠(60mg／kg)腹腔注射麻醉，取剑