新生大鼠下丘脑神经元原代培养及形态学.pdf

CHINESEJ0URNALOFANAT0MYVo1．37No．12014 解剖学杂志 2014年第 37卷第 1期 新生大鼠下丘脑神经元原代培养及形态学 燕美玲 张华婧 孙增荣△ 张 钰 高 娜 李 文 (天津医科大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学系，天津 300070) 摘要 目的：优化下丘脑神经元体外培养方法，观察神经元形态学特点及生长规律。方法：取SD新生鼠，剥离下丘脑 ，机械 吹打法制成单细胞悬液，接种，24h后换为Neurobasal培养基 ；神经元特异性烯醇化酶(NsE)免疫细胞化学法计数阳性细 胞；H-E染色、Nissl染色。结果：原代培养神经元 6～8h内开始贴壁 ，培养 5～7d突起增粗增长，连接成网，以多极神经元 为主，胞体呈三角形、梭形、椭圆形；经NSE鉴定为神经元并且纯度约 9O ；细胞核大而圆，H—E染色胞核深蓝色，胞质红 色，胞体可见尼氏颗粒。结论：改良后培养下丘脑的方法具有稳定的可重复性，可应用于下丘脑神经元培养实验及建立神 经毒性研究模型。 关键词 下丘脑神经元 ；原代培养；尼氏染色 Primarycultureofhypothalamicneuronand itsmorphologicalcharacteristicsinnewbornrat YanMeiling，ZhangHuajing，SunZengron ，ZhangYu，GaoNa，LiWen (DepartmentofOccupationalandEnvironmentalHealth，SchoolofPublicHealth， TianjinMedicalUniversity，Tia in 300070，China) Abstract Objective：Tooptimizethetechniquesofprimarycultivationofneuronsinhypothalamus，andtodeterminethe growthandmorphologicalcharacteristicsoftheneuron．Methods：Thehypothalamusofnew bornSD ratswasdissectedand dispersedmechanicallywithaPasteurpipette，andthenwascultivated．Neurobasalmedium wasaddedafter24hours． Immunocytochemicalmethodwasusedtocountthepercentageofthepositivecells．AndthecellswerestainedwithH—E and Nisslstaining．Results：Primary cultivatedneuronswereadhered in 6-8hours．Neurites，being elongated，thicked and connectedwerefoundin5-7days．Mostneuronsweremultipolar，andcellbodiesweretriangle，spindleandellipseinshape： ThecellsweregreeninNESstaining．Thepuritydegreeofneuronswasabout90 ．NucleuswasbluebyH—E stainingand Nisslbodieswerein thecytoplasm．Conclusion：Thisimprovedprotocolisstableandrepeatable，and itcanbeapplied to cultivatethehypothalamusneuronandcreatetheneurotoxicitymode1． Keywords hypothalamicneurons；primarycultivation；Nisslstaining 下丘脑作为调控神经内分泌的重要部分，由于核 Charcoal／Dex