疟原虫的镜检技术-2014.05.pptxVIP

疟原虫的镜检技术;(一)制片与染色;血膜的制作（所需设备）;血膜的制作（取血时间）;血膜的制作（取血操作）;取血部位和方法;用于检查疟原虫的血涂片有两种： 一种是将血液涂成薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。最好一张玻片上同时制作厚、薄两种血膜。;涂制厚、薄血膜的位置 作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。;厚血膜的制作;薄血膜的制作;正确的推片姿势;标准的疟疾厚薄血膜位置;血膜的编号;制作血膜注意事项;染液的种类;染液的染色原理;注意：蛋白质和氨基酸都是两性电解质，要求染液的pH值7.0-7.2较好。 染液偏酸时，所带的正电荷增加，易于伊红结合，使红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而淋巴细胞和原虫的胞浆着色较差；反之，当染液偏碱时，红细胞和嗜伊红白细胞的颗粒等被染成紫蓝色，不易观察。;姬氏染液母液配置方法;姬氏染液的染色方法;快染 配制8-10%染液(每张血片约需染液2ml):量筒内量2ml缓冲液或新鲜凉开水，直接滴加姬氏原液4-5滴，混匀，滴入待染标本的厚薄血膜上，染色10-15min，清水细缓冲洗，晾干镜检。 慢染 配制3%染液:在染色量筒内量2ml蒸馏水或新鲜凉开水，再滴加姬氏原液2滴，混匀，滴入待染标本上，染色30~40min。清水细缓冲洗，晾干镜检。;血片制作染色评估考核标准;影响染色效果的因素;（4）染液的稀释浓度 染液的浓度高，着色就快而深，疟原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著，但颜色常偏碱；染液浓度过低则染色时间久，颜色偏酸，薛氏点不明显或消失。 （5）染色时间 染色时间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和气温而适当增减。染色时间长染色效果好，反之较差。室温高则着色快，染色时间可略缩短，气温低可适当延长。 （6）染色用水 染液的稀释用水和染色后冲洗用水应选择pH7.0-7.2缓冲液（Na2HPO4,KH2PO4），也可以使用新鲜的蒸馏水或过滤的冷开水。在现场无上述条件时也可用井水、河水、泉水或雨水。 （7）冲洗方法 应沿玻片或染色缸边缘加水使染液表面一层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒附着于血膜。;血片染色注意事项 ;原虫密度计算;在厚血膜，按要求选择视野，计数200个白细胞，同时计数观察到的疟原虫数，如果原虫密度较低，可增加白细胞计数（500~ 1 000 个）。 白细胞疟原虫计算公式： 疟原虫数 ÷ 计数的白细胞数 × 患者每微升血的白细胞数 = 疟原虫数/μl血。 如果不知患者的白细胞数，则每微升血以 8000个白细胞计算(国际标准) 。;白细胞疟原虫计数法举例;从血膜的左上角开始，横向。计数1个视野后间隔5个视野再计数。适用于疟原虫密度较高时。 在1个视野中，有时会重复计数。先把视野分成4个象限，从右上象限起顺时针方向计数整个视野。 ;;;1.4种疟原虫厚薄血膜中各期形态结构及鉴别要点 2.镜检示教 ;人体疟原虫的基本结构;薄血膜中常见的血液成分;如何确定血片为阴性;疟原虫种、期英文缩写;薄血膜Pf形态;恶性疟原虫--环状体;恶性疟环状体、大滋养体;Pf鸟眼状环状体，一个细胞寄生2环状体;恶性疟厚血膜环状体;Pf R;恶性疟裂殖体前期、裂殖体;恶性疟成熟裂殖体;恶性疟雌（大）配子体形态;薄血膜恶性疟雄（小）配子体形态;薄血膜恶性疟雌、雄配子体;恶性疟厚薄血膜下环状体、配子体;薄血膜Pv形态;;薄血膜间日疟大滋养体形态;间 日 疟 大 滋 养 体; 间日疟大滋养体;;间日疟成熟裂殖体;间日疟裂殖体;薄血膜间日疟雌（大）配子体形态;间日疟雄（小）配子体形态;薄血膜 Pv T、S;间日疟早期大滋养体，薛氏点明显;间日疟大滋养体;×1050 厚血膜 Pv;Pv T 厚血膜;三日疟大滋养体、裂殖体;Pm R;;三日疟裂殖体;三日疟雌、雄配子体;三日疟厚血膜裂殖体，裂殖子6个;卵形疟环状体、大滋养体;Po T;卵形疟雌、雄配子体;卵形疟厚薄血膜裂殖体，裂殖子分别为10个、12个;Po S;卵形疟配子体，红细胞扫把状边缘;厚薄血膜的优缺点及适用范围;;;;;疟原虫与其它物体的鉴别;灰尘和染色液的色素沉着 灰尘和染色液的色素沉着在血膜的表面上时，易被误认为是疟色素，可依据其颗粒的形状、大小、色泽、有无核与胞浆的结构来鉴别也可转动显微镜的微调，看是否在同一水平面上。;细菌 细菌尤其是球菌在厚血膜中常被染成红色小点，与疟原虫的核相似，最易混淆。球菌形体较大，边缘光滑，且与红细胞不在同一平面。 水中原虫 水中原虫有时也可看到核、胞浆和空泡，与间日疟大滋养相似，但无疟色素，而空泡多如网眼 植物种子 有很清晰的厚薄一致的