HMME-PDT致犬乳腺肿瘤细胞凋亡相关因子的的分析研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 犬乳腺肿瘤是兽医临床常见的一种肿瘤性疾病。目前，乳腺癌一直以外科手术治疗为主， 并出现了扩大根治和超根治术，但并未能明显提高远期生存率。随着现代科技的发展，光动 力学疗法（photodynamic therapy ，PDT ）成为治疗恶性肿瘤研究的新领域，其作用因素有光 敏剂、光以及氧分子。光敏剂可以被病变靶组织选择性的吸收，在合适波长的光的激发下， 通过能量的转换产生活性氧物质，进而造成对靶组织的损伤，是一种非常有发展前景的能诱 导细胞凋亡和坏死的肿瘤治疗方法。血卟啉单甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether ， HMME ）是一种新型的卟啉类光敏剂，并已在基础实验和临床试验中证明了它的高效性。但 目前国内外HMME-PDT 对犬乳腺癌细胞作用研究较少。本课题采用这种新型光敏剂血卟啉 单甲醚，用波长为632.8nm 的He-Ne 激光照射犬乳腺肿瘤细胞系，探讨其对犬乳腺肿瘤细胞 抑制的机理，为光动力学对肿瘤疾病的治疗提供理论依据。 实验选用从自然发生乳腺肿瘤病例的转移病灶分离培养的细胞系，常规传代培养，取对 数生长期的细胞按分组：空白对照组、单独激光组、单独光敏剂组和实验组（激光照光+光 敏剂）对体外培养的犬乳腺癌细胞株CHMm 进行HMME-PDT 实验，用MTT 法检测其光密 度值OD490 ，观察不同实验条件PDT 对犬乳腺癌细胞在体外的抑制作用，绘制其抑制率曲线； 然后苔盼蓝拒染检测细胞的死亡率；用Hochest33258 染色和电泳技术检测细胞凋亡情况；用 流式胞仪术检测细胞周期；用比色法检测MDA 、NO 的含量和SOD、GSH-PX 的活性；用放 免法检测IL-2 和IL-6 的含量。 实验结果：空白对照组、单独光敏剂组（HMME20µg/mL ）及单独激光组（2.8J/cm2 ）对 细胞增殖均无明显影响，而HMME-PDT （HMME20µg/mL+2.8J/cm2 ）组处理后细胞增殖明显 受到抑制，因此说明HMME-PDT 作用对体外培养的犬乳腺癌细胞株CHMm 的生长有明显抑 制作用，在一定范围内，光动力效应与光敏剂浓度和光照剂量均呈相关关系；HMME-PDT 处理后用Hochest33258 染色、彗星电泳图片可见，细胞产生了明显的凋亡现象，而且随着时 间延长，凋亡更加明显；细胞周期各时间点G0/G1 期比例增加在 12、24、48h 与对照组比较 差异极显著（P0.01) ，而S 期和G2/M 期比例降低在24、48h 与对照组比较以有极显著差异 （P0.01 ），都呈时间依赖性变化，但是S 和G /M 变化不如G /G 明显，说明HMME-PDT 2 0 1 的抑癌作用机理与细胞周期调控相关，具体表现在HMME-PDT 可诱导CHMm 细胞产生G0/G1 细胞周期阻滞；MDA 、NO 的含量增加和SOD、GSH-PX 的活性降低除0h 外，其余时间点 与对照组比较有极显著差异性（P0.01) ，这一结果说明HMME-PDT 通过打破细胞内氧化还 原平衡，增加细胞内自由基的含量来杀伤犬乳腺肿瘤细胞；IL-2 含量升高、IL-6 的含量降低 分别与对照组比较有极显著差异（P0.01 ），表明IL-2 、IL-6 参与了HMME-PDT 对细胞体 外杀伤的发生过程。 关键词 乳腺肿瘤细胞；血卟啉衍生物；光动力疗法；细胞凋亡 I 东北农业大学农学硕士学位论文 Studies of Related Apoptosis Factors on Canine Breast Tumor Cell With HMME-PDT Abstract Canine breast tumor occured frequently in the veterinary clinics. At present, breast cancer is always