抗氧化剂和自由基与血清白蛋白相互作用的微量热和谱学研究Microcalorimetry and spectroscopic studies of the interaction of antioxidants and free radicals with serum albumin.pdf

STUD皿SoNTHEINTERACTIoNMEClIANISMSBETwEEN ANTIoⅪDANTSoRFREERADICALSANDSERUM ALBUMINSBY MICROCALoRmETRYANDSPECTRoSCoPY A DissertationSubmittedto the GraduateSchoolofHenanNormal University inPartialFulfillmentofthe Requirements forthe of Degree Doctorof inScience Philosophy By Li Xiangrong Yan Supervisor：Prof．Lu May,2014 摘要 自由基是生物体内各种生化反应的中间体，由于存在未配对的电子，自由基具有很 高的化学活性。正常情况下，自由基对生物体的生理调控必不可少。但是，当其产生过 量或没有合理控制时，自由基就会表现出危险性，对脂质、核酸、蛋白质等生物大分子 的结构和功能造成损伤。大量生物化学、生物学和临床医学研究表明，自由基对蛋白质 造成的氧化损伤是许多慢性病的发病机理，也是导致衰老的主要原因。抗氧化剂可以提 供氢原子或电子中和自由基的单电子。合理的补充抗氧化剂对维持身体健康、延缓衰老、 预防或治疗疾病具有重要意义。自由基、抗氧化剂和蛋白质三者关系密切，自由基可以 对蛋白质造成氧化损伤，而抗氧化剂可以清除自由基从而对蛋白质起到保护作用，同时 抗氧化剂也可以与蛋白质相互作用导致蛋白质构象的变化。因此，研究抗氧化剂、自由 基、蛋白质的相互作用机制十分重要。 本文得到国家自然科学基金资助课题(No和教育部高等学校博士点专项 141041 基金(No．201 10002)资助，主要从以下四个方面开展研究工作：(1)抗氧化剂和自 由基的相互作用；(2)自由基与蛋白质的相互作用；(3)抗氧化剂和血清白蛋白的相互 作用：(4)抗氧化剂、自由基和蛋白质三元体系的相互作用。主要研究内容和结论如下： 酰肼基)自由基的能力以及它们之间的相互作用机制。结果表明HSA／BSA清除DPPH自 由基的能力和谷胱甘肽类似。DPPH自由基与HSA／BSA的荧光猝灭机理为静态猝灭。 DPPH自由基和HSA的结合存在两类不同的结合位点，结合数约为2，即一分子的HSA 可以和两分子的DPPH自由基反应。DPPH自由基和BSA只有一类结合位点，结合数 的相互作用对色氨酸微环境有一定影响，但对酪氨酸微环境的影响不明显。 2．采用紫外．可见吸收光谱研究了抗氧化剂(L．抗坏血酸、仅．生育酚、B．胡萝卜素、 虾青素、(+)-儿茶素、原花青素B3、谷胱甘肽、褪黑激素)清除DPPH自由基、羟基自 由基以及超氧阴离子自由基的能力，其中原花青素B3清除DPPH自由基的能力最强， 虾青素清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的能力最强。 3．在模拟生理条件下，通过等温滴定量热技术结合荧光光谱，紫外一可见吸收光谱， 傅里叶红外光谱，圆二色谱以及分子模拟等方法，详细探讨了上述八种抗氧化剂与血清 白蛋白的相互作用机制以及所引起的血清白蛋白构象的变化。研究结果表明不同的抗氧 化剂与HSA／BSA的作用机制有所不同。L．抗坏血酸通过“非特异性”表面吸附结合到 猝灭HSA／BSA的内源荧光。洳生育酚与HSA／BSA为形成复合物的“特异性”结合， 荧光猝灭机理为静态猝灭，结合在HSA／BSA位置II的