PKC对心房颤动患者心房肌细胞SK2通道的调节作用及机制研究Study on the effect and mechanism of PKC on the SK2 channel of atrial myocytes in patients with atrial fibrillation.pdfVIP

进捌匡堂陵亟±堂焦途塞 目 录 1 PKC对心房颤动患者心房肌细胞SK2通道的调节作用及机制 研究 ……………………………………………………………1 1．1 中文摘要…………………………………………………………1 1．2 英文摘要…………………………………………………………6 1．4 材料与方法……………………………………………………14 1．5 结果………………………………………………………………33 1．6 讨{仑………………………·······……………·……………·……49 1．7 结论………………………………………………………………61 1．8 参考文献…………………………………………………………62 1．9 英汉缩略词对照表………………………………………………68 2 致谢………···………………···········…··……………………··69 3 心房颤动患者小电导钙激活钾通道及蛋白激酶C对其调控的研 究进展术(综述)…………………………………………………7l PKC对心房颤动患者心房肌细胞SK2通道 的调节作用及机制研究 摘要 目的：心房颤动(Atrial 最常见的快速性心律失常之一，常见于中老年人，可出现肺栓塞、 脑动脉栓塞及心功能不全等严重的并发症。目前AF的发生机制学 说包括“折返(多发子波折返)”学说、“驱动伴颤动样传导”学说、 “肺静脉波’’学说和“房颤致房颤(AF AF)理论。AF的 begets 发生与动作电位不应期缩短密切相关，而动作电位的去极化与复极 化过程则由心肌细胞膜上离子通道的活动决定的。随着AF的发生 和维持机制的深入研究，发现离子通道磷酸化在AF时心房肌的病 理生理过程中发挥重要的作用。由此，我们推测AF发生和维持的 功能性底物是离子通道功能和活性的变化。SK2是小电导钙激活 conductanceCa2+．activated 钾通道(small 亚型，主要在人的心房肌中表达。SK2通道的功能与动作电位期 成细胞膜电位变化，是目前研究AF发生和维持机制的热点离子通 道之一。人类心房肌SK2通道上存在蛋白激酶C(ProteinkinaseC， PKC)磷酸化氨基酸序列，但是AF时SK2通道功能发生何种改变， PKC是否对SK2通道具有调节作用及如何发挥调节作用的报道甚 少。本研究以人的心房肌细胞作为研究对象，采用全细胞膜片钳技 国家自然科学基金资助项目(No：四川省科技厅支撑计划项目(No．201 1FZ060) 术、Western 通道电流的变化、PKC相关途径对SK2通道电流的调节作用、PKC 相对表达水平的变化，旨在探究PKC对人心房肌细胞SK2通道的 调节作用及AF发生和维持的可能机制。方法：(一)全细胞膜片 钳实验 依据患者病历资料及心电图的结果将33例(细胞总数 n=20)接受体外循环手术患者的心房肌细胞分为心房颤动组(AF) (1)改良的两步酶分离法获得单个人心房肌细胞：将体外循环术 除脂肪组织并洗去血凝块后，将心房肌组织剪至约1．5mm3，在酶 I中持续消化20min左右，于倒置相差显微镜下观察到单个心房 肌细胞出现后将心房肌组织立即移至酶II中继续消化，此过程持续 给氧并于37。C水浴箱中进行，当大量立体感强、横纹清晰、细胞 膜完整、折光性好的心房肌细胞出现后立即停止消化。(2)记录人 心房肌细胞SK2通道电流：将两步酶分离法得到的人心房肌细胞 置于全细胞浴液中，选择细胞膜完整、贴壁良好、表面光滑、折光 性强的单个心房肌细胞作为研究对象，全细胞膜片钳模式下给予人 mV， 心房肌细胞记录SK2通道电流的刺激方案：保持电位为．55 mV(10 mV至U+50 mV阶跃)，记录内向整流混合 测试电压从．130 电流，向全细胞浴