怀地黄活性内生菌在预防植物病害和克服连作障碍方面的应用Application of Rehmannia Rehmannia active endophyte in preventing plant diseases and overcoming continuous cropping barriers.pdf

The of bacteriastrainsfrom applicationendophytic in RehmanniaLibosch glutinosa preventingplant diseasesand overcoming obstacles Cropping ADissertationSubmittedto SchoolofHenanNormal theGraduate University ofthe inPartialFulfillment Requirements forthe of Degree Masterof Engineering By Xu Yuanyuan Supervisor：Prof．YangQingxiang May，2014 摘要 怀地黄生产过程中存在两大难题目前还难以解决，一是不能连作，种植过怀地黄的 土地需要间隔8．10年才能再用作怀地黄种植，否则出现严重生长障碍，甚至大片死亡； 另一个就是根腐病或斑枯病等病害危害造成严重减产。最近研究发现，一些植物内生菌 在土壤里有一定的活性，其对大分子有机物的分解作用和对其他病原微生物的拮抗作用 等可能有利于上述问题的解决。因此我们从药用植物怀地黄中分离筛选具有抗菌生防活 性的内生细菌，制成菌剂，通过盆栽和大田实验，将菌剂施加到怀地黄根际土壤中，在 不同生长时期检测活性内生菌菌剂对怀地黄生长状况、根际土壤化学性质、酶活性的影 响，监测其土壤微生物区系的动态变化，探讨植物内生细菌作为益生菌在预防植物病害 和克服连作障碍方面的可行性。具体研究成果包括如下几方面： (1)利用平板分离法从新鲜的怀地黄块根中分离内生细菌，选择大肠杆菌、金黄色葡 萄球菌、黑曲霉、地黄斑枯病病原菌和地黄根腐病病原菌作为供试菌株，采用点菌法、 平板对峙法和菌饼法测定其抗菌活性。共分离获得32株怀地黄内生细菌，其中30株菌 对上述5种供试菌的一种或多种具有抗菌活性，8株细菌对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 和黑曲霉有拮抗作用，2株细菌对选取的5种供试菌都有拮抗作用，且抗菌活性较强。 通过16SrRNA基因序列分析，这32株怀地黄内生菌主要分布在芽孢杆菌属、假单胞菌 属和大肠埃希氏菌属，其中对地黄斑枯病和根腐病都具有拮抗作用的内生菌主要集中在 芽孢杆菌属中。 (2)怀地黄活性内生细菌对植物病害的防治有一定的改善作用，盆栽研究结果显 示，施加病菌的盆栽苗发病率为100％，而同时施加病菌和菌剂a的怀地黄明显具有抗 根腐病和斑枯病的生防作用，防效分别达到33％和44％。大田试验表明，连作土壤为 施加菌剂的对照组发病率达到了68％，菌剂1处理为20％，比对照降低了48％。菌剂2 处理发病率为24％，比对照降低了44％。且菌剂处理的发病植株，病情不严重，主要集 中在l级，对照组发病最严重的达到了5级。 (3)大田试验监测了怀地黄生长过程中植株和土壤的动态变化，植株的生长状况、 土壤化学性质和土壤酶活性在怀地黄不同生长时期有不同的变化。从Q．PCR结果可以 看出在连作土壤的种植过程中细菌始终是优势菌群，土壤的细菌数量明显高于真菌数量， 与对