玻璃化法低温保存脐血造血干祖细胞导入洗脱过程的优化.pdfVIP

玻璃化法低温保存脐血造血干/祖细胞： 导入洗脱过程的优化 1 1 1 1 2 张蕾 ，马学虎 ，刘名彦 ，刘天庆 ，崔占峰 1 2 （大连理工大学干细胞与组织工程实验室，辽宁 大连 116024；牛津大学 工程科学系， 英国） 摘要：设计分步导入洗脱程序，对脐血造血干/祖细胞进行玻璃化低温保存。对照组采用 10%DMSO， 1℃/min 降温速率对细胞进行慢冻保存。利用冷台对保护剂的玻璃化过程进行可视化研究。复苏后细胞用台 盼蓝拒染法计活率，并用流式细胞仪对 CD34+细胞进行表面抗原鉴定计数。结果表明：联合玻璃化保护剂 在降温速率和复温速率均为 100℃/min 时，可以实现完全玻璃化，且仅有轻微短暂的反玻璃化现象。五步 导入保护剂，每步平衡90s，细胞活率为83.0±1.2%。洗脱时，五步导出，每步平衡60s， 且加入0.5M 海 藻糖溶液，可以显著提高细胞回收率。单核细胞经由玻璃化低温保存，平均回收率为81.5±1.7%，与传统慢 速冻存法的细胞回收率74.7±2.6%相比，具有显著性差异。两种方法的CD34+细胞回收率分别为32.5±4.6% 和30.7±2.2%，无明显差异。 关键词：脐带血；造血干/祖细胞；玻璃化低温保存；CPA 中图分类号：O643.6；Q813 文献标识码：A 文章编号： Vitrification of Hematopoietic Stem/progenitor Cells Derived from Human Umbilical Cord Blood : Optimization of Loading and Removing Process 1 1 1 1 2 Zhang Lei ，Ma Xuehu ，Liu Mingyan ，Liu Tianqing ，Cui Zhanfeng 1 （Dalian RD Center of Stem Cells and Tissue Engineering ，Dalian University of Technology ，Dalian 116024 ， 2 Liaoning ，China；Department of Engineering Science, University of Oxford ，UK） Abstract: Hematopoietic stem/progenitor cells (HS/PCs) call for feasible cryopreservation methods before the clinical transplantation. Characteristics of the multi-component CPA were studied and the stepwise loading and removing processes were designed. Mononuclear cells (MNCs, rich in HS/PCs) were cryopreserved using the vitrification protocol, and the conventional method (10%DMSO, 1 ℃/min cooling rate) was conducted as the control. The results showed that the multi-component CPA achieved satisfactory vitri