法医学尸体组织中管家基因的稳定性研究及影响因素分析Study on the stability of housekeeper gene in forensic autopsy and analysis of its influencing factors.pdfVIP

分类号：2289 单位代码： 10114 密级： 学 号： 201010139 法医学尸体组织中管家基因的稳定性研究 及影响因素分析 of A on and factors influencinghousekeeping stability study inforensic tissues gene postmortem 研 究 生： 黄耘主 指 导 教 师： 任亡瞳 副教授 申请学位门类级别： 医堂亟± 专 业 名 称： 法医堂 研 究 方 向： 洼医损伍痘理堂 所 在 学 院： 出酉医科太堂法医堂院 2013年3月 2 万方数据 万方数据 万方数据 法医学尸体组织中管家基因的稳定性研究及影响因素分析 摘要 研究目的 在进行基因表达研究之前，数据的标准化策略显得尤为重要。理想的 内参基因应该容易检测并且在细胞周期中保持稳定表达。在不同死后经过 时间里获取的法医学尸体组织对内参基因的稳定性提出了更高的要求。为 了判断通常使用的人体内参照基因(管家基因)在不同的死后间隔时间内 的稳定性，本课题组在前期动物实验研究基础上，以法医学尸体组织中管 家基因表达的稳定性为主要研究目标，收集不同死后间隔时间的尸体检材 (脑皮质、脾组织、胸大肌)，并延长观察时间，使用实时定量RT—PCR技 值，力求探究法医学尸体组织中管家基因的稳定性与完整性；并对rRNA各 试图解决分子标记物的选择对RNA定量的影响；在此基础上还初步研究了 年龄对管家基因稳定性的影响。 材料方法 研究对象：分别提取6例不同死后间隔时间的尸体上的三种组织(脑 皮质、脾组织和胸大肌)，并根据年龄段分为婴幼儿组(0—3岁)和成人组 (15—60岁)，每组3例。尸检即刻分别于大脑皮质、脾组织、左侧胸大肌 处取1cm3大小组织块(50mg)，经lOOmM 稳定液处理后转入-80度低温冰箱保存备用。另取适量(59)组织放入装有 PBS缓冲液的广口瓶并离体放置于人工气候箱中(比照生前环境温、湿度设 240h)取样，并分装于RNAlater稳定液中低温冻存。 试验方法：组织提取RNA；RNA反转录为cDNA第一链；分别设计引物， 通过实时荧光定量PCR检测6例尸体脑皮质、胸大肌、脾组织中不同时间 的Ct值。 万方数据 统计学处理：实验所得数据采用均数±标准差表示，多样本均数比较 采用方差分析，各组数据用SPSSl3．0软件进行t检验。 研究结果 1．6种管家基因在直到死后间隔时间第10天时，仍可以被检出。其中 大脑皮质中，除管家基因OAZl各时间点Ct值差别无统计学意义，其余5 OAZl在PMI=9天时Ct值即开始显著增高；而胸大肌内6种管家基因各时间