医学遗传学与分子诊断.pptVIP

PART 医学遗传学与分子诊断的临床应用 演讲人：马怡 2016.4.15 细胞生物学 运用分子技术诊断遗传病的原理和策略 基因的遗传病诊断 以分子生物学为基础的基因诊断则是在作为生命的遗传基础 物 质—— D N A 水平上对遗传疾病进行诊断，可揭示发病的遗传本质，不但可鉴定表现症状的有害基因纯合的个体，也可鉴定出没有异常表型的有害基因的携带者，尤其适于早期诊断。遗传疾病的基因诊断则是进 行产前诊断和症状前诊断的最有效手段。 传统的遗传病诊断 传统的遗传疾病诊断方法有三种 ：临床学诊断 、诊断和生物化学诊断 。这些诊 断方法都是以疾病的表型病变为依据。而表型则易受外界环境的影响这就在一定程度上影响了诊断的准确性和可靠性 。 遗传疾病基因诊断的发展概况 1 第一阶段 20世纪80年代，DNA分子杂交，RFLP方法 2 第二阶段 1985年PCR技术 3 第三阶段 基因芯片，高通量密集型技术 分子诊断常用技术 1 DNA印迹 2 生物芯片 3 第一代DNA测序技术 4 第二代DNA测序技术 5 实时定量PCR 分子诊断常用技术 Southern于1975年发明了DNA印迹技术，通过限制性内切酶将DNA片段化，再以凝胶电泳将长度不等的DNA片段进行分离，通过虹吸或电压转印至醋酸纤维膜上，再使膜上的DNA变性与核素标记的寡核苷酸探针进行分子杂交，经洗脱后以放射自显影鉴别待测的DNA片段探针间的同源序列。 生物芯片技术可分为基于微阵列的杂交芯片与基于微流控的反应芯片 2种。目前使用微流控芯片进行指导用药的多基因位点平行检测是主要临床应用领域。 1 2 分子诊断常用技术 Sanger法是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，并且在每个碱基后面进行荧光标记，产生以A、T、C、G结束的四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而获得可见的DNA碱基序列。 目前常见的高通量第二代测序平台主要有Roche 454,Illumina等,其均为通过DNA片段化构建DNA文库、文库与载体交联进行扩增、在载体面上进行边合成边测序反应，使得第1代测序中最高基于96孔板的平行通量扩大至载体上百万级的平行反应，完成对海量数据的高通量检测。 实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。目前常用的两种为SYBR GREEN和Taqman探针。 3 4 5 Carbamazepine-Induced Toxic Effects and HLA-B*1502 Screening in Taiwan Example The identification of subjects carrying the HLA-B*1502 allele and the avoidance ofcarbamazepine therapy in these subjects was strongly associated with a decrease inthe incidence of carbamazepine-induced SJS–TEN. Conclusion PART