单增李斯特菌.pptx

;一、单增李斯特菌概述;其中单增李斯特菌(Listeria monocytogenes/L.mono)是唯一能引起人类疾病的。单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。 流行病学 相关食品 鲜奶、巴氏消毒奶、奶酪（尤其是软奶酪）、冰激凌、热狗 生的蔬菜 发酵过的生肉制作的香肠 生的和加工过的禽肉 各种生的肉类、冷冻肉类 生的和烟熏的鱼肉等 ;致病性 LM为典型的胞内寄生菌，能在巨噬细胞、上皮细胞、内皮细胞和肝细胞内增殖。能引起人和动物患脑膜炎、脑炎、败血症、心内膜炎、流产、脓肿和局部的脓性损伤，可造成孕妇流产、死胎等疾病，发病者死亡率可达20％～70％人类李斯特菌病感染对象主要是新生儿、孕妇、老年人和免疫功能低下者，免疫正常人群很少感染LM 。 ;市场情况 1999年底，美国发生了历史上因食用带有李斯特菌的食品而引发的最严重的食物中毒事件，据美国疾病控制和防治中心资料显示，在美国密歇根州有14人因食用被该菌污染的“热狗”和熟肉而死亡，在另外22个州97人患此病，6名妇女流产。1992～1995年法国出产的奶酪及猪肉中发现李斯特菌。2001—2009年以来，我国质检部门多次从美国、加拿大、法国、爱尔兰、比利时、丹麦等20多家肉类加工厂进口的猪腰、猪肚、猪耳、小排等30多批近千吨猪副产品中检出单增李斯特菌、沙门氏菌等致病菌。为了解北京市食品受单核细胞增生性李斯特菌污染状况，2004—2005年间，崔京辉等从北京市几个市场及宾馆饭店共采集了270份熟食、生肉制品、水产品等8类食品进行检测LM。;结果：共检出LM58株，检出率为21.5％。其中熟肉制品采集50件，检出率最高为48％，生肉制品共采集115件，检出率为18.3％，生食蔬菜采集35件，检出率为20％，水产品采集25件，检出率为16％，冰淇淋采集45件中检出率为2.2％。 2007年，冯守望对珠海市6类冷冻食品共3586份样品检测李斯特菌，LM检出率为2.18％，其中以冰鲜鱼翅检出率最高、为36.36％；其次为生鲜奶、冻猪肚、冻猪舌、冻猪脚，带菌率为10％～15％；冷藏鸡、鸭、鸽带菌率为6％一8％；冷藏蔬菜类带菌率为2.33％；保鲜牛奶带菌率为0.68％。 在美国LM被列为7种主要的食源性致死病??之一,已经被WHO食品安全工作计划列为重点检测的食源性病原菌之一。 ;二、单增李斯特菌的检测方法;（2）显色培养基：上海欢奥科贸有限公司：特异性100%；检测限小于5UFC/25g样品。实验步骤：1、增菌，25g样品+225ml半量Fraser肉汤30℃培养24小时；2、涂布接种0.1ml到ALOA平板37℃培养24小时。 （3）胶体金快速检测卡：无锡中德伯尔生物技术有限公司 检测限为105CFU/ml；检测需10min;（4） PCR试剂盒 1）北京吉诺思科贸公司：美国伯乐iQ-Check单增李斯特菌的检测：iQ-Check系统采用了所有的实时荧光PCR方法的优点为食品中病原微生物提供快速和可靠地检测解决方案。iQ-Check试剂盒为食品和环境样品中的单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)定性检测试剂盒。 2）陆桥： 单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）荧光定量PCR检测试剂盒 报价：1680 48T 3）索奥： 单增李斯特菌(LM)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 报价：2800 40T ;4）生物梅里埃的检测系统：能常规同时检测食品和环境样本中的李斯特菌属和单增李斯特菌 测试时间 : 120分钟 2天出结果 5）杜邦： BAX?系统检测法，BAX?系统的单增李斯特菌检测法的灵敏度和特异性比率达到了98%，，并通过USDA-FSIS和AOAC国际的认证，成为官方检测法 6）北京祥龙环宇生物技术有限公司 单增李斯特菌凝胶及荧光定量PCR检测试剂盒 ;（5）乳胶凝集试剂盒：广州环凯：Microgen 李斯特氏菌乳胶凝集试剂盒 （6） ELISA检测试剂盒 德国拜发李斯特菌酶联免疫试剂盒：样品预处理:预增菌，选择性增菌；检测下限1个李斯特菌/25克样品；孵育时间: 30 + 30 + 30 分钟：产品说明书;三、单增李斯特菌抗体的制备 ;（3）建立胶体金免疫层析技术快速定量检测单增李斯特菌方法（中国检验检疫科学研究院） 该法可在10min内完成定性和半定量检测，定量检测灵敏度为3.5×103cfu/ml，线性范围3.5×105-3.5×108cfu/ml，回收率在99%-101.7%之间。 单增李斯特菌P60多克隆抗体（由吉林出入境检验检疫局提供）、羊抗兔IgG（购自鼎国生物技术公司）。;抗原免疫 （1）单增李斯特菌ActA的表达、免疫原性研究及单克隆抗体的制备：原核表达单