分子生物学第四章 蛋白质的翻译.docVIP

教案首页 课程名称 分子生物学 任课教师 李市场 第 四章 蛋白质翻译 计划学时 9 教学目的和要求： 掌握遗传密码的构成及特点。遗传密码的破译；密码的简并性与变偶假说；密码子的使用频率；起始密码子与终止密码子；遗传密码的突变；重叠密码。掌握原核生物和真核生物RNA的翻译过程。核糖体及RNA的结构；氨基酸的激活与氨酰-tRNA的合成；原核生物的蛋白质的生物合成；GTP在蛋白质合成中的作用；真核生物的蛋白质的生物合成；蛋白质折叠与蛋白质生物合成中多肽链的修饰；蛋白质的易位与分泌。 3、说明Prok.和Euk.体内蛋白质的越膜机制。 4、简要说明Prok.与Euk.的翻译起始过程的差别。 第四章蛋白质翻译（Protein Translation） 概述：蛋白质翻译是基因表达的第二步，tRNA在翻译过程中起“译员”的作用，参与翻译的RNA 除tRNA外，还有rRNA和mRNA；tRNA既是密码子的受体,也是氨基酸的受体，tRNA接受AA要通过氨酰tRNA合成酶及其自身的 paracodon的作用才能实现，tRNA通过其自身的anticodon而识别codon，密码子有自身的特性，三联体前两个重要通用性摇摆性，有一定的使用效率；多种翻译因子组成翻译起始复合物，完成翻译的起始、延伸和终止，并且保证其准确性。 第一节基本元件 一、tRNA：最小的RNA，4S，70 ~ 80个base 1、tRNA的高级结构： 1964 Holly. R. 鉴定出tRNAphe的二级结构为三叶草形（77个NT） （1）三叶草结构（5个臂4个环）： a、氨基酸接受臂（aaaccept arm）：tRNA的5’与3’-末端碱基配对形成，3’端永远为不配对的CCA序列，最后的A的3’或2’-OH可以被氨酰化。 b、另外是D （DHU环双氢脲嘧啶）环D臂:反密码子环反密码子臂(anti—codonarm),附加臂（extra arm）TψC环TψC臂,其中附加臂通常是可变的. c、含丰富的稀有碱基（约70余种碱基核糖残基）:反密码子3 ’端邻近部位。 （2）“L”形三级结构： a、“L”构型的结构力：二级结构中的碱基堆积力和氢键，二级结构中未配对碱基形成的氢键； b、“L”结构域的功能：accept arm 位于“L”的一端，契合于核糖体的肽基转移酶结合位点P A, 以利肽键的形成---anti-codonarm 位于”L”另一端，与结合在核糖体小亚基上的codonof mRNA配对；TΨC loop DHU loop 位于“L”两臂的交界处，利于“L”结构的稳定---“L”结构中碱基堆积力大使其拓扑结构趋于稳定wobble base 位于“L”结构末端堆积力小自由度大使碱基配对摇摆。 2、tRNA的种类： （1）起始tRNA和延伸tRNA： 起始tRNA:Prok中，携带甲酰甲硫氨酸（fMet），Euk中，携带甲硫氨酸（Met）。 延伸tRNA：其他tRNA。 （2）同工tRNA（isoacceptingtRNAs）：携带AA相同而反密码子不同的一组tRNA。不同的反密码子识别AA的同义密码，结构上能被AA–tRNA合成酶识别的共性。 (3) 校正tRNA： 3、副密码子与氨酰基tRNA的合成 （1）氨酰基tRNA的合成执行着双重功能：为肽建的合成提供能量，执行遗传信息的解读。 实验证实—模板mRNA只能识别特异的tRNA而不是AA （2）AA–tRNA合成酶（AARS）：需要三种底物AA tRNA ATP，因此有三个位点AA binding site, Trna binding site，ATP site。反应为AA + tRNA+ ATP在AAR作用下生成氨酰基与tRNA的3’端A的2’/3’—O结合。 Prok中AARS有20种，对AA专一（同工受体），Prok和Euk有一定的差别，可分为两类，反应机制的差别： Type Ⅰ类酶先将氨酰基转移到tRNA3’端A的2’-OH，然后通过转酯反应转移到3’–OH上；TypeⅡ类酶直接将氨酰基转移至3’–OH 上。 两类酶与tRNA反应时接近模式不同，合成酶与tRNA相互束缚的普通模型提出：蛋白沿L型分子的一侧束缚tRNA（tRNA的两端被束缚）。 （3）Paracodon(副密码子)的概念：tRNA中决定负载特定氨基酸的空间密码 a、1988. Schimmel和侯雅明：G3 : U70是决定tRNA负载Ala 的特异密码信息。 b、1991. schummanL.证明；tRNAmetf的paraco