喉癌stk15基因异常与中心体扩增、染色体不稳定的分析laryngeal cancer stk15 gene abnormality and centrosome amplification, chromosome instability analysis.pdfVIP

中文摘要 前 言 (染色体异常酷被认为是肿瘤缁胞的特征性改变，而细胞有丝 分裂异常常可以引起染色体不稳定。中心体作为细胞的主要微管 组织中心，在细胞周期过程中建立两极纺锤体，调节细胞有丝分 裂，从而对维持染色体的稳定起着重要的作用。因此肿瘤细胞中 的染色体异常可能与中心体的异常密切相关。现已发现了许多肿 瘤细胞中存在多种中心体异常，而中心体扩增是常见异常之一。 STKl5基因是一种与中心体密切相关的基因，它的髯常可以引起 中心体扩增，导致染色体不稳定，从而引起细胞转化。i 喉癌是一种东北地区高发的头颈部恶性肿瘤。本研究应甩半 癌细胞系Hep一2中STKl5基因的表达水平和突变情况；并以 Hep一2细胞系为代表，应用免疫荧光方法检测喉癌中心体扩增情 况；常规和高分辨G显带及荧光原位杂交(FISH)分析染色体不稳 定状态。以研究STKl5基因异常弓I起中心体扩增及染色体不稳 定在喉癌中的作用，从而探索其发生机理，并为早期诊断和治疗提 供科学依据。 ／ f实验材料与方法 、 1．实验材料 1．1 喉鳞状细胞癌组织标本、人喉鳞状细胞癌细胞系 Hep-2、正常人胚肺成纤维细胞系WI-38 1．2 RT—PCR及PCR—SSCP相关试剂 l。3鼠抗1微管蛋自单克隆抗体、FITC偶联山羊抗鼠I蜘 ·1· 及相关试剂 1．4 G显带及HSH相关试剂 2．实验方法 2．1 应用半定量RT—PCR方法，以癌旁正常组织为对照检 测50例喉癌并以正常人胚肺成纤维细胞系WI一38为对照检测 Hep一2细胞系中STKl5基因mRNA表达水平。 因第6、7外显子突变。 2．3 以WI一38细胞为对照，应用免疫荧光方法检测 Hep一2细胞中中心体扩增情况。 2．4应用常规和高分辨G显带对Hep一2细胞系进行核型 分析，并应用HSH方法分析Hep一2细胞中20号染色体数目。 实验结果 达，Hep一2细胞中STKl5基因的表达水平高于Ⅵq一38细胞，经 统计学分析，肿瘤组与对照组差异显著。 2．在上述组织和细胞中均未检测到STI(15基因第6、7外显 子的突变。 3．Hep一2细胞中发现了明显的中心体扩增：中心体数目变化 范围为1—7，有中心体扩增的细胞(即中心体数目2)为11— 23％，明显高于WI一38细胞。 4．(1)Hep一2细胞核型分析显示该细胞系中存在显著的染 色体不稳定：染色体数目变化于43—84条之间，众数为69—74 条，结构畸变涉及易位、缺失和等臂染色体等，主要表现为13条标 记染色体；(2)FISH结果显示Hep一2细胞系中有明显的20号染 色体多体性。 ·2· 讨 论 一、肿瘤中STKl5基因的异常 STKl5基因已被证实是一种癌基因，它在中心体的成熟、纺锤 体的建立及染色体的正常分离过程中起着重要的调控作用。它的 高表达可引起中心体扩增，从而引起染色体不稳定和细胞转化。 本研究检测了50例喉癌组织及Hep一2细胞系中该基因表达水 平，结果在34例(68％)喉癌和Hep一2细胞系中检测到了STKl5 基因的高表达。我们在Hep一2细胞系发现了显著的20号染色体 多体性，STKl5基因就定位于20号染色体，因此该细胞系中应该 存在该基因的扩增，即Hep一2细胞中基因扩增是其表达增高的 原因之一。 另外，已有研究显示在多种肿瘤中STKl5基因激酶活性增 高，而编码序列突变常可以导致蛋白活性的改变，但目前尚无 STKl5基因突变的报道。本研究中我们以第6、7外显子为研究对 象，进行该基因的突变检测，在50例喉癌和Hep一2细胞系中均未 检测到第6、7外显子的突变，但这并不能排除STKl5基因突变的 可能。 可见STKl5基因异常可能是肿瘤发生的重要原因之一，但引 起其异常的机制是复杂的，有待进一步研究。 二、肿瘤细胞中心