Langendorff灌流规范操作.docVIP

Langendorff灌流标准操作规范 一、实验室大致布局设置：6个平台 药品柜——分析天平——水槽——磁力搅拌器——冰箱——氧气罐和Langendorff灌流模型 NaCl 118 NaHCO3 25 KH2PO4 1.2 MgSO4 1.2 KCl 4.7 葡萄糖 10 CaCl2 1.25 2、分析天平使用规范：称量时左右玻璃门双开或双闭，放上称量纸后调零，称量尽量精确，每次称量后，匙要擦干净，确保各药品间无污染。药品不小心倒出，要关掉后才能擦拭。称量好后关机，并把玻璃门合好。 3、取水注意：要求用单蒸水，用两个5L的标刻度塑料量杯。 4、配KH液注意事项： 称量尽量精确，每次称量后，匙要擦干净，确保各药品间无污染 CaCl2溶液应该在最后加进去（当其余药品完全溶解后） CaCl2不要加太快，否则很容易出现沉淀，安全做法：用大烧杯稀释后再缓慢加进去 最后配置完成后的KH液应当是澄清透明的 5、保证冰箱清洁，及时清理冰箱内放置不用物品 6、Langendorff灌流平台上操作注意事项： 这个平台上要准备一把小剪刀、小直镊、小弯镊、有刻度离心管（测冠脉流量用，10ml）、盛有冰KH液的玻璃皿。 恒温水槽打开，预充氧15min，使KH液有一定的氧含量和维持于370C，以模拟体内环境。 用手抵住灌流瓶底部，至KH液满并溢出为止，然后用皮套扣住顶部，使其密封，确保不漏液或气体，且保证灌流瓶内无气泡。 确保KH液灌注高度为76 mmHg(保证恒压状态) 确保装置的管子无液体外漏，也无杂物堵塞，也无气泡，通畅干净，否则对各项心功能指标有较大影响 确保循环水循环正常，如果水管意外堵塞，会出现心率减慢的情况。 确保换能器正常，无气泡 确保球囊无气泡 7、杀老鼠注意事项： 有一把大剪刀、大镊子，和手术用光滑细线（用时截一段，一端叼于嘴中） 左手拎大鼠尾巴，右手用木锤击其头部，把大鼠敲晕，注意动作要狠、准、快，然后拉断颈椎，使鼠瘫痪 开胸 8、取心脏，开胸规范操作： 注意不要把心脏捏伤 主动脉不要剪太短，最好煎在三根主动脉弓部位 心脏取出后应立即置于冰KH液中，用拇指和食指轻轻挤压几下（注意不要太重），以除尽心室中及冠脉中残余的血液，然后把心脏移入盛有新鲜冰KH的玻璃皿中，迅速剪去多余组织，注意不要把心室、主动脉剪破。 挂心脏规范操作： 打结：然后左手持弯镊，右手直镊，将主动脉套在玻璃口下，注意不要插太深（防止把主动脉瓣插破），也不要插得太浅，以免KH液漏出或心脏固定不牢，固定好大概位置后，用弯镊夹住，防止其上下滑动，然后开始打结。细线的一头用嘴固定，另一头由右手的小拇指、无名指及中指固定，线绕着大拇指和食指一圈，然后用这个圈把心脏套进去，掌握好大致位置后，用食指将线头勾出，然后打结，并固定住。迅速打开KH液，使心脏恢复灌流，套上保温杯，使其稳定。 10、插球囊及注水：左心耳剪掉一半，露出小口，然后将球囊内水挤尽，插入左心室内，插到底，然后缓慢注水，观察屏幕，使LVEDP在6~10之间。 （注：从取心脏到挂上心脏，时间最好控制在1分钟左右，动作越迅速越好） 11、 12、 13、实验结束注意事项： 球囊内水抽尽，拔出，三通关闭，将球囊浸于蒸馏水中，注意球囊不能暴露于空气中，否则弹性不好并且容易进气泡，最终导致测量结果不准确，并记得把三通关闭。 把使用过的仪器清洗干净 各器具按使用前原样放好 倒掉流出的冠脉废液 到指定地方丢老鼠尸体 四、常见问题处理 1、出现最大心室内压上不去的情况： 心脏是不是太小 老鼠状态不好 取心脏时有没损伤心肌 仪器定标有无问题 可适当延长稳定的时间（因为不同来源的老鼠可能需要稳定的时间有所不同） 球囊或换能器有无进气泡 球囊是否插到心室底 2、出现HR上不去的情况 循环水是否循环正常，有没被堵塞 KH液成分是否正常 老鼠状态 3、出现CF过大或过小的情况 过大： 灌注瓶的口子比较大，使每份流量比较多 是否超过76mmHg 心脏是否比较大 是否事先给药 有无把心室剪破 有无把主动脉插破 有无插错位置 过小： 管子有没被堵住 是否低于76mmHg 心脏是否比较小 是否事先给药 老鼠状态不好 出现心率异常： KH液成分是否正常 老鼠状态不好 是否事先给药 不规范操作等人为因素 5、心脏急救做法：用冰冷的KH液刺激或浸泡，可以除颤 如果给过药后或损伤处理后，不要轻易抢救！ 如何制作球囊 如何定标 （以上是个人的一点小结，如有不对，请帮忙修改！） 吕萍萍