慢病毒siRNA靶向干扰YAP基因胃癌细胞株的建立.pdfVIP

605 现代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine Vol.11 NO.4 FEB.2011 · · 慢病毒 siRNA 靶向干扰 YAP 基因胃癌细胞株的建立 * 周 洲 朱金水△ 许志朋 （上海交通大学附属第六人民医院消化科 上海 200233） 摘要 目的：构建并鉴定 YAP 基因短发夹干扰 RNA(shRNA)慢病毒载体 ，建立稳定干扰 YAP 基因表达 的胃癌细胞株 SGC7901。 方法：荧光定量 PCR 检测 YAP 基因在多种 胃癌细胞株中的表达情况 。构建重组靶向 YAP 基因的 shRNA 慢病毒表达质粒 PGC-shRNA-YAP ，用脂质体转染 的方法将载体导入 胃癌细胞。经杀稻瘟菌素筛选后 ，建立稳定表达 siRNA 的细胞株。荧光定量 PCR SGC7901 YAP PGC-shRNA-YAP 检测干扰效率 。结果：在 胃癌细胞株 中， 基因显示高表达 。测序验证 重组质粒构建成功。将 重组质粒稳定转染入 胃癌细胞株 SGC7901 后能明显抑制 YAPmRNA 表达水平 。结论：成功构建了 PGC-shRNA-YAP 慢病毒重组 质粒 ，建立了靶向稳定干扰 YAP 基因表达的 siRNA 胃癌细胞株 SGC7901。 YAP SGC7901 RNA 关键词 ： 基因 ；慢病毒载体 ；胃癌细胞株 ； 干扰 Q28 Q75 Q78 R735.2 A 1673-6273 2011 04-605-06 中图分类号： ， ， ， 文献标识码： 文章编号： （ ） Establishment of Gastric Cancer Cells with Stable Interference by siRNA Targeting YAP Gene* △ ZHOU Zhou, ZHU Jin -Shui , XU Zhi-Peng (Dep artment of Gastroenterology, Sixth Peop le s Hosp ital Affiliated to Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200233) ABSTRACT Obj ective: To construct siRNA expression vector targeting YAP gene and establish the gastric cancer cells SGC7901 with stable inhibition of YAP gene. Methods: Rea-time PCR was used to examine the YAP gene expression in sevel gastric cancer cell lines. The recombinant lentivirus PGC-shRNA-YAP vector was constructed, which was transfected into gastric cancer cells by Lipofec- tamine 2000. After gastric