红豆草胰蛋白酶抑制剂性质的分析（续）与一级结构的测定the analysis of the nature of sainfoin trypsin inhibitor (to continue) and determination of the primary structure.pdfVIP

摘 要 新疆红豆草胰蛋白酶抑制剂(简称 OSTI)是 1998 年新发现的一种对 Trypsin 具有强烈抑制作用的蛋白质 发现后对其进行了初步的研究 在已有基础上 本 论文着重对OSTI 的性质 续 及其一级结构进行了深入探讨 研究内容及结果 如下 1. 研究红豆草胰蛋白酶抑制剂 OSTI 的分离纯化 采用硫酸铵盐析 FPLC. Mono S 柱层析 得到了经PAGE 电泳纯化的OSTI 用SDS方法 测得分子量为2.2 万左右Da 2. 研究OSTI 的部分性质 以BAPNA 为底物 在最适条件下 测定反应速 度 酶量曲线 并进行比较 测定结果表明 OSTI 对胰蛋白酶的抑制 作用属不可逆抑制 以BAPNA 为底物 测定反应最终OD 值 根据OD 值求出不同浓度抑制下的剩余活力 以OSTI 的量为横坐标 酶剩余活 力的百分比为纵坐标 通过计算得到OSTI 对Trypsin 抑制的摩尔比约为 2 即1 分子OSTI 可抑制2 分子Trypsin 以环己二酮对OSTI 的Arg 进 行修饰 结果表明Arg 是OSTI 的活性中心氨基酸 用顺丁稀二酸酐对 OSTI 的Lys 进行修饰 结果表明Lys 也是OSTI 的活性中心氨基酸 由 此修饰结果可见OSTI 有Arg 和Lys 为中心的两个活性中心 3. 测定OSTI 的一级结构 该项测定是由本实验室提供测定样品 并由The Walter and Eliza Hall Institute for Medical Research of Australia 协助完成 采用MS 测定蛋白质序列技术 即将PAGE 干胶带转移到硝酸膜上 分 别用Trypsin 和V8 酶切OSTI 经Hplc 得到纯肽 然后采用Ms 测定肽 片段顺序 最后从不同蛋白酶酶切片段顺序中 找到重叠部分 经拼凑 即得到整个OSTI 序列 OSTI 的一级结构由203 个氨基酸残基组成 N 端为Met C 端为Ala 将 得到的序列与蛋白质结构库查对 OSTI 序列与 Kunitz-type Trypsin Inhibitor KTI2 Soybn 同源性为88% 因此 OSTI 是属于Kunitz 这一家族的新成员 OSTI 一级结构的确定为进一步获得其基因及其未来的深入开发应用奠定了重 要基础 关键词 红豆草 蛋白酶抑制剂 一级结构 性质 Mensuration of Primary Structure and Character of Trypsin Inhibitor from Onobrychis Saliva Hou Xindong (Biochemistry and Molecule Biology) Supervised by Yu Meihui and Wang Ying Abstract The Trypsin Inhibitor from Onobrychis Saliva in Xinjiang(OSTI) was found in 1998. It is a kind of protein that can inhibit trypsin intensively. Based on the primary study on it, the study on primary structure and character of OSTI was done in this paper. The research content and results are as follows: