16S rDNA克隆文库方法对制药废水处理系统中微生物多样性的研究 Microbial community diversity in the alternate-flow biological reactor of pharmaceutical wastewater by 16S rDNA clone library.pdfVIP

生态环境学报2009，18(4)：1236一1240 http：／～懈wjeesci．c响 andEnVironmentalSciences Ecology 16S rDNA克隆文库方法对制药废水处理系统中 微生物多样性的研究 徐成斌1，孟雪莲2，马溪平P，张利红1，李法云1，付保荣1，惠秀娟1 1．辽宁大学环境学院，辽宁沈阳ll0036；2．辽宁大学药学院，辽宁沈阳110036 摘要：采用分子生物学构建16srDNA克隆文库的方法对制药废水交替流生物反应器内的微生物群落进行了多样性研究，该 NTIsuite (1．0％)，Deltaproteobacte—a(1．0％)。使用vector 知细菌16srDNA序列绘制系统进化树，表明克隆子与已知菌之间的基因系统进化关系。 关键词：制药废水；微生物多样性；16srDNA克隆文库 中图分类号：x703 文献标识码：A 文章编号：1674．5906(2009)04．1236．05 16S 来，针对处理高盐度、高浓度制药废水的水质特性 rDNA是目前微生物生态学研究中最广 泛使用的“biomarker”，该段序列中包括了保守区基础上发展而成的。该工艺具有较高的系统稳定 和可变区，已经成为细菌种属鉴定和分类的标准 性，对CODcr以及多种特殊污染物去除效率高。 方法…。16SrDNA克隆文库是微生物分子生态学反应器的活性污泥的微生物种群结构多样，其稳定 中用来调查环境中原核微生物组成的常用方法之 性和种群恢复性能在维护处理系统有效性具有重 一【21，这种方法不需要环境中微生物的纯培养，突 要作用【5-6】，但目前对该废水处理工艺微生物的多 rDNA 破了用传统的微生物分离纯化的方法调查微生物 样性研究报道甚少。因此，本研究采用16S 多样性时大多微生物无法得到纯培养的限制，能 克隆文库的方法对ABR系统中微生物多样性进行 够更全面和系统地揭示各种生态环境中前所未知 研究，以确定其中的优势菌群，对其微生物群落结 的微生物多样性pJ。 构特性进行初步了解，为该工艺的高效稳定运行提 制药企业排放的生产废水大多为综合性废水， 供科学依据。 具有污染物质成分复杂、有机物浓度高，有毒有害 1材料和方法 物质和难降解物质含量高、总盐量高、处理难度大 1．1 样品采集 等特点【41。交替流生物反应器(Altemate．flow样品采集于制药污水处理系统ABR池(根据工 Bi010百calReactor，ABR)是结合了uNITANK的特艺特点，该池中的微生物群落包括工艺系统的所有种 点，将连续流反应器和间歇式反映器的优点结合起 群)，取样时工艺的运行条件和运行结果见表l和表 表1 ABR运行控制参数 T{lbIel The oftIleABR opemtionp跏eters 2。监测方法参见《水和废水监测分析方法》【刀。 1．2活性污泥总DNA提取方法 活性污泥总DNA提取方法为优化的分子克隆 方法【8】。 dNTP，0．5皿1’aq 16S 1．3 rDNA—PCR扩增条件 司)，引物各0．5此，DNA模板1．5此。 辽宁省科技厅项目232) 作者简介：徐成斌(1980年生)男，讲师，主要从事环境微生物工程研究。E-眦il：xuch∞gbin80@163．com