六双波长分光光度法.docVIP

典型实验教学案例简介 案例x 双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中两组分含量 药物的含量测定是药物质量控制的重要方面。紫外分光光度法以其准确度、灵敏度高，简便快速等特点，成为药物含量测定的重要方法。紫外法测定含量时，常选择被测组分的最大吸收波长最为测定波长，以提高检测的灵敏度。当用紫外法测定复方制剂多组分中一种组分的含量时，共存组分常常也会有吸收干扰，此时，消除干扰就成为准确测定的关键环节。双波长分光光度法作为计算分光光度法的一种，就是消除干扰、实现多组分含量同时测定的一种有效手段。本实验就以复方磺胺甲噁唑片为实验对象，通过双波长分光光度法测定其两组分的含量，从而达到学习双波长法的原理和操作的目的。 一、实验目的 1．掌握双波长分光光度法的测定原理。 2．熟悉双波长分光光度法在复方制剂分析中的应用。 二、实验原理 当吸收光谱重叠的a、b两组分共存时，若要消除a组分的干扰测定b组分，可在a组分的吸收光谱上选择两个吸收度相等的λ1和λ2，测定混合物的吸光度差值。然后根据ΔA值计算b的含量。 SMZ在257nm波长处有最大吸收，TMP在此波长吸收最小并在304nm波长附近有一等吸收点，故选定257nm为SMZ的测定波长（图1），在304nm波长附近选择参比波长。 TMP在239nm波长处有较大吸收，此波长又是SMZ的最小吸收峰，并在295nm波长附近有一等吸收点，故选定239nm为测定波长（图2），并规定在此波长附近选择供测定的参比波长。由于参比波长对测定影响较大，故采用对照品溶液来确定。此波长可因仪器不同而异，测定时应仔细选择。 三、仪器与试剂 1.主要仪器：紫外-可见分光光度计；100mL容量瓶磺胺甲噁唑0.4%氢氧化钠溶液；0.1mol/L盐酸溶液氯化钾 四、实验步骤 1．磺胺甲噁唑的含量测定 （1）平均片重测定：10片，精密称定。 （2）供试品溶液配制： （3）对照品溶液配制 （3）取对照品溶液（2）的稀释液，以257nm为测定波长（λ2），在304nm波长附近（每间隔0.5nm）选择等吸收点波长为参比波长（λ1），要求ΔA= A λ2（2）－Aλ1（2）= 0，再在λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液（1）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA），计算，即得。 2．甲氧苄啶的含量测定 （1）稀释液配制：取上述供试品溶液与对照品溶液(1)、(2)各5.00mL，分别置于100mL容量瓶中，各加HCl-KCl溶液（0.1mol/LHCl 75mL + 6.9gKCl，加水至1000mL），稀释至刻度，摇匀。 （2）参比波长选定：取对照液(1)的稀释液，以239nm为测定波长(λ2)，在295nm附近（每间隔0.2nm）选择等吸收点波长为参比波长(λ1) ，使ΔA=A λ2（1）－Aλ11）= 0在λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液（2）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA），计算，即得。 3．结果计算 式中ΔAu为供试液的ΔA值，ΔAs为对照液的ΔA值，Cs为对照液浓度（mg/mL），D为稀释倍数，W为取样量。 五、注意事项 1.测定之前应先检查仪器波长是否准确。 2.仔细寻找等吸收点波长 3.注意供试品溶液和对照品溶液的准确配制 六、思考题 1双波长分光光度法是如何消除干扰的？ 2应用双波长分光光度法应如何选择测定波长和参比波长？ 图紫外吸收图谱 1. TMP(5.0μg/ml); 2.SMZ(25.0μg/ml); 3. SMZ+TMP; 4. 辅料 图l SMZ紫外吸收图谱 1. TMP(0.2μg/ml); 2.SMZ(10.0μg/ml); 3. SMZ+TMP; 4. 辅料 100mL 研磨 过滤 溶解、定容 乙醇 片剂 精密称取片粉 (约50mg SMZ, 10mg TMP) 0.4%NaOH 2.00mlL 100mL 0.4%NaOH 2.00mlL 对照液(2) 对照液(1) 定容 定容 乙醇 50mg SMZ对照品 10mg TMP对照品 105 ℃干至恒重 精称 100mL 乙醇