细胞工程《生物技术与生活》《生物技术概论》 视图选择纯黑白即可使用.pptVIP

植物原生质体融合 ? 化学诱导法：PEG、高 Ca2+、高pH。 ? 物理诱导法：微电极法。 植物体细胞融合 杂合体的鉴别与筛选 ? 显微镜鉴别法 ? 遗传互补法 ? 细胞与分子生物学鉴别法 ? 在生植株形态特征鉴别法 植物体细胞融合 ? 单倍体育种 单倍体(haploid):只有一个染色体组（只含有体细 胞染色体数目一半）的细胞或者个体。 天然：如孤雌繁殖途径，植物细胞不经受精而发育 成单倍体胚，继而长成单倍体植株。 人工诱导：例如，用花药或花粉培养。单倍体植物 很小，生活力弱，完全不育（染色体不平衡）。 * 单倍体通过加倍以后可以得到纯二倍体。缩短育 种时间，保证基因纯合存在，不会发生分离。 植物细胞工程 单倍体在植物育种上的重要性 单倍体染色体加倍可获得纯合二倍体 有利于远缘杂交新类型的培育和稳定 与诱变育种相结合可加速育种进程 可作为外源基因转化的受体系统 植物细胞工程 花粉培养 花粉的分离 机械分离法 自然散落法 花粉的培养 浅层液体培养法 看护培养法 植物细胞工程 单倍体培养物的加倍 染色体的人工加倍方法 ? 物理法：如温度骤变、机械损伤、电离和非电离 辐射、离心力等 。 ? 化学法：如秋水仙素、吲哚乙酸、氧化亚氮 (N20) 等处理。 应用最普遍而有效的方法是用秋水仙素处 理。 植物细胞工程 染色体加倍 秋水仙素的作用：抑制处在分裂盛期的细胞纺锤 丝的形成，染色体的长度收缩；但不影响染色体 的纵裂。由此使细胞停顿在分裂中期，染色体虽 能复制，但不能分向两极，造成染色体数目加倍 而成多倍体。当药剂洗净后，细胞便可恢复正常 的分裂。 植物细胞工程 ? 人工种子的研制 人工种子及人为制造的种子，是一种 含有植物胚状体或芽、营养成分、激素以 及其他成分的人工胶囊。 植物细胞工程 人工种子 制备 （1）胚状体制备及其同步生长 （2）人工胚乳的制备 （3）配制包埋剂及包埋 模仿天然种子结构制造出来的生命有机体，能象 种子一样萌发再生，长成植物。其核心“部件”是—个 被外层物包埋的具有类似种胚功能的胚状体，在其发 育早期与不定芽相似，但具有极性，可以分化出茎端 和根端。 胚状体可从悬浮培养的单细胞或通过试管培养的 愈伤组织、花粉或胚囊而获得，一般在培养物的表面 产生，是无性繁殖的产 物。 我国利用组织培养法已成功地在烟草、水稻、小 麦、 玉米、甘蔗、棉花等作物上诱导出了胚状体。 将胚状体包埋在一个能提供营养的胶质种囊里，便成 了所谓的“人工种 子”。 人工种子 作为21世纪极具发展潜力和经济价值的高科技 成果，人工种子的突出优点： ① 不受环境因素制 约，一年四季进行工厂化生产；② 胚状体是经人 工无性繁育产生，有利于保存种系的优良性状； ③ 与试管苗相比，人工种子成本更低，更适合于 机械化田间播种，并可根据需要在人工胚乳中添 加适量的营养物、激素。农药、抗生素、除草剂 等，以利胚状体的健康生长。 人工种子应用前景 细胞工程 动物细胞工程 ? 细胞培养 离体细胞在无菌培养条件下的分裂、生 长，在整个培养过程中细胞不出现分化，不 再形成组织。 ? 组织培养 动物体的某类组织在体外培养时，细胞 一直保持原已分化的特性，该组织的结构和 功能持续不发生明显变化。 单个细胞 培养 剪碎 胰蛋白酶 洗涤 离心 动物细胞工程 细胞培养法 组织器官（细胞来源） 大量培养动物细胞方法 ? 微导管培养法 ? 微载体培养法 ? 微胶囊培养法 动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞工程 1?2mm2小块 培养瓶 漂洗 切割 动物细胞工程 组织培养法 目的组织 37℃培养 倒置15?30min 翻回平卧 动物细胞工程 培养物传代 难题：组织培养物细胞贴壁生长？ 物理法（冲洗、刮取）、化学法（酶 解）剥离，漂洗后移置于新培养瓶。 动物细胞工程 无血清培养 ?无血清培养基 ①基础培养基：普通干粉培养基（DME、HamF12） ②基质因子（胎球蛋白、胶原、多聚赖氨酸等） ③生长因子、激素、维生素等微量物质 动物细胞工程 培养物的长期保存 ? 经典传代法：关键？无菌传代。 ? 冷冻保存法：具有操作简便、保存期长的特点。 以液氮保存法为例： （1）将成熟培养物（细胞）与5％～10％的甘油或二甲亚矾 混匀，封装于若干个安瓶瓶中； （2）